塞來(lái)昔布對(duì)糖尿病大鼠視網(wǎng)膜TNF-a、ICAM-1、VEGF表達(dá)的影響及意義.pdf

1、目的：糖尿病視網(wǎng)膜病變（DR）是糖尿病最常見(jiàn)的微血管并發(fā)癥之一，出現(xiàn)較早且隨糖尿病病程的延長(zhǎng)而逐漸加重，到達(dá)晚期可發(fā)生玻璃體積血、纖維血管膜形成或牽拉性視網(wǎng)膜脫離，視功能嚴(yán)重受損，治療棘手且費(fèi)用高、療效差，嚴(yán)重影響患者的身心健康和生活質(zhì)量，已成為四大主要致盲眼病之一。因此，如何及早正確的防治DR成為亟待解決的問(wèn)題。其發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明，近年來(lái)的研究發(fā)現(xiàn)DR中存在很多炎癥因素的參與，因而有人提出DR是一種炎癥疾病。此觀點(diǎn)的提出可能為預(yù)防

2、和治療DR提供新的思路。國(guó)外有文獻(xiàn)報(bào)道，非甾體抗炎藥（NSAID）阿斯匹林可通過(guò)抑制TNF-a及ICAM-1的表達(dá)，減低糖尿病鼠視網(wǎng)膜內(nèi)的白細(xì)胞黏附、血視網(wǎng)膜屏障的損壞進(jìn)而改善早期DR。早期的流行病學(xué)研究報(bào)道：類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者在規(guī)律地服用非選擇性環(huán)氧化物酶抑制劑——阿司匹林后，患糖尿病性視網(wǎng)膜病變的危險(xiǎn)性大大減低。上述研究說(shuō)明非甾體抗炎藥有防治糖尿病性視網(wǎng)膜病變的作用。非甾體抗炎藥可抑制兩種環(huán)氧化酶（COX）：COX-1和COX-2，

3、現(xiàn)有研究表明在糖尿病大鼠視網(wǎng)膜中COX-2的表達(dá)顯著增高而非COX-1，且抑制COX-1可導(dǎo)致嚴(yán)重的胃腸并發(fā)癥，因此應(yīng)用選擇性COX-2抑制劑可能對(duì)糖尿病性視網(wǎng)膜病變有抑制作用。塞來(lái)昔布（商品名為西樂(lè)葆，celecoxib）作為一種新型非甾體抗炎藥，是一種高選擇性COX-2抑制劑，具有很強(qiáng)的抗炎、鎮(zhèn)痛、解熱等藥理作用，且能顯著降低NSAID所引起的嚴(yán)重的胃腸道不良反應(yīng)。
　　 本研究通過(guò)觀察塞來(lái)昔布對(duì)糖尿病大鼠視網(wǎng)膜COX-2、

4、TNF-a、ICAM-1、VEGF等因子的抑制作用及對(duì)視網(wǎng)膜超微結(jié)構(gòu)的影響，探討糖尿病性視網(wǎng)膜病變的發(fā)生機(jī)制以及該藥對(duì)糖尿病性視網(wǎng)膜病變的抑制，為該藥的應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，也為糖尿病性視網(wǎng)膜病變的預(yù)防提供一種新的思路。
　　 方法：將30只SD大鼠用四氧嘧啶腹腔注射制成糖尿病大鼠模型，隨機(jī)分成實(shí)驗(yàn)對(duì)照組（N=15）和實(shí)驗(yàn)組（N=15），另選15只正常大鼠作為空白對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)組大鼠經(jīng)口灌胃塞來(lái)昔布50mg/kg，一天兩次，直至實(shí)驗(yàn)結(jié)

5、束。實(shí)驗(yàn)對(duì)照組給予同等劑量的生理鹽水，空白對(duì)照組則未采取任何干預(yù)措施。于第三個(gè)月末腹腔注射過(guò)量水合氯醛處死大鼠，迅速摘除眼球。取視網(wǎng)膜進(jìn)行光鏡及透射電鏡觀察，應(yīng)用免疫組化法檢測(cè)視網(wǎng)膜內(nèi)COX-2、TNF-a、ICAM-1、VEGF四種因子的表達(dá)。通過(guò)與電腦相連的HPIAS-1000型高清晰度彩色病理圖文分析系統(tǒng)做細(xì)胞COX-2、VEGF、ICAM-1、TNF-a表達(dá)的半定量分析，計(jì)算平均灰度值。用SAS8.0統(tǒng)計(jì)軟件完成統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

6、r>　　 結(jié)果：1.光鏡觀察：空白對(duì)照組大鼠視網(wǎng)膜各層組織排列整齊，未見(jiàn)明顯異常。實(shí)驗(yàn)對(duì)照組大鼠視網(wǎng)膜組織內(nèi)、外核層細(xì)胞排列紊亂，內(nèi)核層明顯變薄，視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞數(shù)目較空白對(duì)照組明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=27.36，P<0.01）。實(shí)驗(yàn)組大鼠視網(wǎng)膜損傷較實(shí)驗(yàn)對(duì)照組為輕，視網(wǎng)膜組織內(nèi)外核層細(xì)胞排列與空白對(duì)照組所見(jiàn)相似，基本整齊，視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞數(shù)略有減少，較實(shí)驗(yàn)對(duì)照組大鼠視網(wǎng)膜稍多，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=14.23，P<0.01）

7、。2.電鏡觀察：實(shí)驗(yàn)對(duì)照組大鼠基底膜薄厚不均，部分區(qū)域劈裂成數(shù)層，周細(xì)胞線粒體脊和膜融合消失，內(nèi)皮細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)吞飲小泡增多，光感受器外節(jié)盤膜排列紊亂，盤膜間隙增大，部分?jǐn)嗔?、溶解。?shí)驗(yàn)組大鼠視網(wǎng)膜損害較實(shí)驗(yàn)對(duì)照組減輕，基底膜薄厚基本均勻，內(nèi)皮細(xì)胞扁平，周細(xì)胞未見(jiàn)明顯異常，外節(jié)盤膜排列略不整齊，斷裂溶解情況減輕。3.免疫組化結(jié)果顯示：空白對(duì)照組視網(wǎng)膜內(nèi)COX-2、TNF-a、ICAM-1、VEGF免疫組化反應(yīng)呈弱陽(yáng)性，四種因子的表達(dá)量低，而

8、實(shí)驗(yàn)對(duì)照組視網(wǎng)膜內(nèi).四種因子的免疫組化反應(yīng)呈強(qiáng)陽(yáng)性，表達(dá)量增高（分別為t=30.78，P<0.01；t=39.21，P<0.01；t=37.47，P<0.01；t=19.08，P<0.01），實(shí)驗(yàn)組視網(wǎng)膜內(nèi)四種因子與實(shí)驗(yàn)對(duì)照組相比免疫組化陽(yáng)性反應(yīng)減弱，四種因子的表達(dá)量減低（分別為t=16.38，P<0.01；t=26.84，P<0.01；t=14.93，P<0.01；t=10.77，P<0.01）。
　　 結(jié)論：糖尿病大鼠視網(wǎng)膜