WT1基因及其異構(gòu)體在白血病中表達(dá)與臨床應(yīng)用.pdf

1、目的:探討慢性粒細(xì)胞白血病患者和急性白血病患者不同病程階段、不同亞型之間骨髓細(xì)胞中WT1的表達(dá)水平及其與臨床預(yù)后、監(jiān)測(cè)微小殘留病(MRD)的關(guān)系；尤其是白血病患者接受異基因骨髓移植后骨髓細(xì)胞中WT1的動(dòng)態(tài)表達(dá)水平在監(jiān)測(cè)MRD中意義。同時(shí)探討不同白血病細(xì)胞株及不同亞型急性白血病患者中WT1(+17AA)/(-17AA)異構(gòu)體表達(dá)，以及WT1(+17AA)/(-17AA)異構(gòu)體表達(dá)的改變與NB4細(xì)胞誘導(dǎo)分化的關(guān)系。探討WT1肽特異性CTL對(duì)

2、白血病細(xì)胞體外靶向免疫治療作用。 方法:建立實(shí)時(shí)定量RT-PCR方法，采用LightCyclerPCR儀檢測(cè)了15例初診CML患者、108例不同病程階段AL患者、15例白血病患者allo-BMT前后(11l例次)和23例非白血病患者骨髓中WT1及內(nèi)參GAPDH的表達(dá)水平，以WT1N=(WT1拷貝數(shù)/GAPDH拷貝數(shù))×104計(jì)算WT1表達(dá)水平，詳細(xì)記錄所選患者的臨床資料。同時(shí)檢測(cè)NB4細(xì)胞誘導(dǎo)分化過(guò)程中WT1及WT1(+17AA

3、)異構(gòu)體動(dòng)態(tài)變化，計(jì)算WT1N(+17AA)值，并用流式細(xì)胞儀檢測(cè)NB4細(xì)胞表面抗原CDllb的變化。采用MJPCR儀檢測(cè)K562、SHI、Jurkat、NB4、NB4/WT1A、NB4/WT1D等白血病細(xì)胞株及79例初診急性白血病患者骨髓中WT1基因和WT1(+17AA)異構(gòu)體表達(dá)水平，以ABL基因作為內(nèi)參，計(jì)算WT1(+17AA)/WT1比值。WT1、WT1(+17AA)異構(gòu)體及ABL基因引物及探針序列均由PrimerPriemer