CCN3促進膠質瘤細胞侵襲作用及可能機制研究.pdf

1、背景和目的:腦膠質瘤是顱內最常見的惡性腫瘤之一，發(fā)病率高、死亡率高、預后差，嚴重危害人類的健康，而膠質瘤的侵襲是臨床治療效果提高的重要障礙。因此，闡明其發(fā)病機理、尋找新的生物學標記物及治療靶標以提高治療效果已成為亟待解決的重大課題。腫瘤微環(huán)境是近年來腫瘤學研究的熱點，腫瘤細胞生物學行為的維持需要其所在的微環(huán)境提供支撐。腫瘤微環(huán)境包括腫瘤間質細胞創(chuàng)造的微環(huán)境和腫瘤細胞自身通過旁分泌或自分泌創(chuàng)造的微環(huán)境，本課題將以低惡性膠質瘤細胞A172和

2、高惡性膠質瘤細胞U87為研究模型，觀察分泌型蛋白CCN3在膠質瘤細胞中的作用并初步探討可能的分子機制。
　　方法:(1)用實時熒光定量PCR實驗檢測A172和U87細胞中CCN3的表達情況，同時用ELISA檢測A172和U87細胞培養(yǎng)上清液中CCN3的蛋白含量;(2)用人CCN3重組蛋白刺激A172細胞，用MTS試驗觀察細胞的增殖情況，Transwell試驗觀察CCN3刺激前后A172細胞及U87細胞的侵襲能力;(3)用NF-κB

3、活性檢測報告基因實驗檢測CCN3刺激前后A172細胞及U87細胞中的NF-κB的活性，同時用western blot檢測相關細胞中NF-κB上游調控者PI3K/Akt/IκBα的表達水平或活化狀態(tài);(4)應用PI3K/Akt抑制劑LY294002單獨或與CCN3共同處理A172或U87細胞，觀察LY294002能否逆轉CCN3誘導的NF-κB活性增加和侵襲能力增強。
　　結果:(1) U87細胞中CCN3在mRNA的表達水平是A1

4、72細胞中的15.63倍，CCN3在A172細胞培養(yǎng)上清液中的含量是48.62pg/ml，而在U87細胞培養(yǎng)上清液中的含量是549pg/ml;(2) U87細胞的侵襲能力強于A172細胞，10ng/ml的CCN3能明顯增強A172細胞的侵襲能力，而對細胞增殖能力無明顯影響;(3) U87細胞中NF-κB活性及PI3K和Akt的磷酸化水平高于A172細胞，而IκBα蛋白水平低于A172細胞，10ng/ml的CCN3能明顯上調A172細胞中

5、NF-κB的活性及PI3K和Akt的磷酸化水平，而下調IκBα的蛋白水平;(4) PI3K/Akt抑制劑LY294002能抑制U87細胞中NF-κB的活性，下調Akt磷酸化水平，上調IκBα蛋白水平，LY294002能抑制CCN3誘導的A172細胞中Akt磷酸化水平的上調和IκBα蛋白的下調，并且LY294002能抑制U87細胞及CCN3誘導的A172細胞的侵襲能力。
　　結論:(1)高惡性膠質瘤細胞中CCN3的表達及細胞培養(yǎng)上清