邪毒內(nèi)侵致動脈粥樣硬化的機制及清熱解毒法的干預研究.pdf

1、1.目的本課題研究以CPN感染加高脂飼料的模式復制出邪毒內(nèi)侵致動脈粥樣硬化動物模型；結(jié)合臨床試驗，就其在血脂、炎癥指標、氧化應激、纖溶系統(tǒng)等幾個方面的影響探討邪毒內(nèi)侵致AS的機制。觀察清熱解毒法對這些指標的作用，并觀察清熱解毒法在AS形成早期階段的干預作用，為AS的預防提供新的思路與途徑。 2.試驗方法(1)動物試驗。采用高脂飼料飼喂C57BL/6J小鼠并予以肺炎衣原體滴鼻感染(每隔周接種1次，共3次，6周時間)的方式造成AS模

2、型，另設(shè)一亞組第8周時加入蛋氨酸形成高同型半胱氨酸血癥，觀察對AS的影響。予以黃連素、阿奇霉素、立普妥灌胃進行干預，并設(shè)黃連素早期干預組(在造模開始階段即開始給予黃連素)，比較其作用。第16周后處死小鼠，取血清及胸主動脈送檢。檢測指標血清學檢查主要包括血脂(并根據(jù)血脂計算動脈硬化指數(shù))，ELISA法檢測高敏C反應蛋白、IL-1β、氧化型低密度脂蛋白。病理學檢查主要包括普通HE染色及計算內(nèi)膜下單核細胞浸潤數(shù)，免疫組化查熱休克蛋白-70(H

3、SP-70)計算染色系數(shù)(=染色強度*染色面積)，電鏡檢查。 (2)臨床試驗。選取動脈粥樣硬化的病人共50例。按照治療組：對照組約2：1的比例隨機分為治療組(33例)和對照組(17例)。按照其病程長短，分為急性期和慢性期。在西醫(yī)基礎(chǔ)治療上治療組給予三黃片治療2周。分別在治療前后觀察以下指標。炎癥指標：CRP、hs-CRP、hcy、WBC；其他指標：血脂、動脈硬化指數(shù)、纖維蛋白原、D-二聚體。 3.試驗結(jié)果(1)動物試驗。

4、黃連素早期干預對于血脂及動脈硬化指數(shù)的影響與立普妥相當，優(yōu)于黃連素后期干預組及阿奇霉素組。對TG、HDL的作用與阿奇霉素相當。對于TG的影響優(yōu)于其他各組。在造模的影響因素中，高脂、CPN均加重血脂指標，而且加CPN組更高于單純高脂組。普食+CPN組與高脂+CPN組對血脂的影響作用無差異。飼料中加蛋氨酸制成高hcy血癥，對于血脂及動脈硬化指數(shù)的作用與不加者比較差異明顯。 對OX-LDL的影響，黃連素早期干預組優(yōu)于晚期干預組，但與阿

5、奇霉素、立普妥之間無差異。在單純高脂組，黃連素對OX-LDL的水平無影響。高脂+CPN與空白對照組(普食+無CPN)、普食+CPN、高脂組之間有顯著性差異。普食+CPN組與普食+CPN+hcy組之間有顯著性差異。 對IL-1β的影響，B1組的作用與阿奇霉素、立普妥相當，優(yōu)于B2、B3組。高脂+CPN的IL-β水平高于其他，有統(tǒng)計學差異。加用蛋氨酸飼料，IL-β水平與相應對照組之間無差異。 對于高敏C反應蛋白的影響，B1組

6、明顯優(yōu)于B2、B3、立普妥組，與阿奇霉素之間無差異。在單純高脂飼料組，施加黃連素(B3組)作用優(yōu)于對照單純高脂飼料組。造模方面，無論高脂、普食，CPN均促進高敏C反應蛋白表達，與無CPN組有顯著性差異。但高脂+CPN與普食+CPN之間無差別。加用蛋氨酸飼料，高脂+CPN組與高脂+CPN+hcy組之間hs-CRP有顯著性差異。 病理HE染色及電鏡檢查。HSP-70染色B1組與阿奇霉素組、立普妥組三組之間比較無差異，優(yōu)于B2、B3組

7、、高脂+CPN組。高脂+CPN、普食+CPN、高脂+無CPN組之間無顯著性差異。普食+CPN組與普食+CPN+hcy組及高脂+CPN組與高脂+CPN+hcy組之間無差異。對內(nèi)膜下單核細胞浸潤的作用，B1、B2、B3、阿奇霉素組(與立普妥組相當)、高脂+CPN組之間比較，均有顯著性差異。B1組優(yōu)于其他各組。在HE染色及電鏡下觀察，各組有不同程度的內(nèi)皮細胞突起，中膜彈力纖維破壞，單核細胞浸潤及泡沫細胞形成。電鏡下還可見線粒體、溶酶體等細胞器

8、的破壞。B1組、立普妥組、阿奇霉素組優(yōu)于其他組。 (2)臨床試驗。對血脂的影響，治療組對TG的影響大于對照組。治療組與對照組的(TC-HDL)/HDL、TC/HDL有顯著性差異。組內(nèi)比較，治療后均較治療前有差異。在急性期亞組，治療組與對照組的(TC-HDL)/HDL、TC/HDL、LDL/HDL均有顯著性差異。 對FIB及D-D二聚體，治療前、后組間比較均無差異。組內(nèi)比較，治療前后有差異(治療組降低更明顯，P＜0.01)

9、，但兩組之間無差異。急性期亞組也同樣結(jié)果。 對C反應蛋白、高敏C反應蛋白，治療前各組之間均無差異。CRP在治療后兩組比較沒有差異，治療前后組內(nèi)比較沒有差異。hs-CRP在治療組與對照組比較有差異；治療前后組內(nèi)比較，在治療組有差異。在急性期亞組分析也如此。 對Hcy的作用治療前各組之間均無差異。總體比較及急性期亞組比較均提示，治療后，治療組降低hcy優(yōu)于對照組。組內(nèi)比較，各組治療前后比較均有有差異。 對WBC的影響

10、，各組在治療前后組間比較均無顯著性差異。組內(nèi)比較，治療前后有顯著性差異。 4.結(jié)論(1)動物試驗。高脂、CPN均加重血脂指標及粥樣硬化指數(shù)，說明CPN感染加重血脂異常，對AS有促進作用。黃連素早期干預作用與立普妥相當，優(yōu)于黃連素后期干預組及阿奇霉素組。hcy血癥通過對血脂及動脈硬化指數(shù)的影響而對AS有促進作用。 高脂、CPN均增加OX-LDL表達，說明CPN感染通過氧化應激，對AS有促進作用。黃連素早期干預組優(yōu)于晚期干預

11、組，但與阿奇霉素、立普妥之間無差異。普食+CPN+Hcy增加OX-LDL的表達，CPN與Hcy可協(xié)同增強氧化應激反應，促進AS發(fā)展。但在高脂飼料中無影響。 高脂、CPN均增加IL-1β表達，說明CPN感染通過炎癥介質(zhì)，對AS有促進作用。黃連素早期于預組優(yōu)于晚期干預組，但與阿奇霉素、立普妥之間無差異。hcy在造模中對IL-1β水平無影響。 無論高脂、普食，CPN均促進高敏C反應蛋白表達，B1組明顯優(yōu)于B2、B3、立普妥組，

12、與阿奇霉素之間無差異。hcy在高脂及CPN作用基礎(chǔ)上，促進hs-CRP表達。 CPN及Hcy對于HSP-70半定量檢測無影響。黃連素早期干預作用與阿奇霉素組、立普妥組相當，優(yōu)于B2、B3組、高脂+CPN組。高脂加CPN，加HCY均導致單核細胞對內(nèi)膜的浸潤增強，黃連素早期干預由于其他各組。 (2)臨床試驗。不論治療組、對照組清熱解毒法調(diào)脂治療均有效，但僅有TG與對照比較有差異；在急性期的調(diào)脂脂治療對于TG、HDL的作用治療

13、組優(yōu)于對照組。 本試驗表明清熱解毒治療可以有效干預動脈硬化指數(shù)，對于急性期的干預作用更強。 清熱解毒治療可以降低急性心腦血管疾病患者的FIB及D-D二聚體水平，抑制纖溶系統(tǒng)激活，但是這個作用與對照組比較無統(tǒng)計學差異。 hs-CRP較CRP更能反映AS的炎癥反應，清熱解毒治療能更好的干預炎癥指標hs-CRP，尤其對于急性期患者。 清熱解毒治療有效的影響hcy，提示可以阻斷或減輕該時期的炎癥反應，減緩AS進程