子癇前期患者血紅素氧合酶的表達(dá)及意義.pdf

1、目的:子癇前期(Preeclampsia，PE)是妊娠期特有的疾病，該病嚴(yán)重威脅母兒健康，是孕產(chǎn)婦及圍產(chǎn)兒患病及死亡的主要原因之一。子癇前期的發(fā)病原因及機(jī)制至今尚未完全闡明，但研究表明，胎盤(pán)滋養(yǎng)層細(xì)胞功能障礙、血管內(nèi)皮損傷和氧化應(yīng)激水平增強(qiáng)是子癇前期基本病理生理過(guò)程，而血管內(nèi)皮損傷被認(rèn)為是子癇前期病理變化的中心環(huán)節(jié)。研究證實(shí)多種血管活性因子如可溶性酪氨酸激酶1(soluble Fms-like tyrosine-1，sFlt-1)、可溶

2、性?xún)?nèi)皮因子(soluble Endoglin，sEng)、胎盤(pán)生長(zhǎng)因子(Placental growth factor，PLGF)、氧自由基等與血管內(nèi)皮損傷發(fā)生相關(guān)，上述指標(biāo)的升高或降低是子癇前期的較好的預(yù)測(cè)指標(biāo)。血紅素氧合酶(Heme oxygenase，HO)是血紅素代謝的起始酶和限速酶，調(diào)節(jié)著血紅素代謝的動(dòng)態(tài)平衡，催化血紅素降解為同摩爾的一氧化碳(CO)、膽綠素和鐵，而膽綠素在膽綠素還原酶作用下，可迅速生成膽紅素。HO有3種亞型，

3、HO-1是可誘導(dǎo)型，HO-2為結(jié)構(gòu)型，HO-3在組織表達(dá)少、功能不明確且研究較少。研究認(rèn)為HO-1和HO-2對(duì)維持正常妊娠有重要作用，它能夠舒張血管、促進(jìn)血管生成、調(diào)控胎盤(pán)胎兒血管張力、降低胎盤(pán)灌注壓維持正常胎盤(pán)循環(huán)。此外，其還具有抗氧化、抗凋亡等作用。HOs的異常表達(dá)可能通過(guò)調(diào)控血管活性物質(zhì)參與子癇前期的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程。因此本實(shí)驗(yàn)通過(guò)測(cè)定子癇前期孕婦HO兩種亞型的表達(dá)情況及母體血清膽紅素(Bilirubin)濃度，探討HOs與子癇前期

4、的相關(guān)性，旨在為子癇前期的發(fā)病提供新的理論依據(jù)，開(kāi)辟新的診療思路。
　　方法:
　　1.研究對(duì)象:按照第8版《婦產(chǎn)科學(xué)》的診斷標(biāo)準(zhǔn)作為重度子癇前期的入選標(biāo)準(zhǔn)隨機(jī)選取2013-2至2014-12于河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院產(chǎn)前檢查和住院的重度子癇前期65例，發(fā)病孕周＜34周的早發(fā)型子癇前期(Earlyonset preeclampsia，EPE)組35例，＞34周的晚發(fā)型重度子癇前期(Late onsetsevere preecla

5、mpsia，LSPE)組30例，同期隨機(jī)選取33例健康孕婦作為對(duì)照組。
　　2.標(biāo)本采集:所有研究對(duì)象采取母血，臍血及胎盤(pán)組織。分娩前取空腹靜脈血6ml，在室溫下靜置2小時(shí)，1000rpm，離心20分鐘，取上層血清液，置于EP管中，保存于-70℃冰箱，用于檢測(cè)血清HO-1、HO-2及膽紅素。胎兒娩出后胎盤(pán)娩出前于距臍帶胎盤(pán)插入部5cm內(nèi)，取靜脈血3ml，處理同母血。胎盤(pán)娩出后立即取胎盤(pán)母面近臍帶根部直徑3cm范圍內(nèi)的組織，約1cm

6、×1cm×1cm大小，生理鹽水沖洗后浸潤(rùn)至10％福爾馬林溶液中室溫固定24h，然后進(jìn)行脫水、石蠟包埋等。
　　3.檢驗(yàn)指標(biāo)及方法:母血、臍血血清HO-1、HO-2濃度采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(Enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)測(cè)定;采用免疫組織化學(xué)技術(shù)(Immunohistochemistry，IHC)顯微鏡下觀察胎盤(pán)中HO-1、HO-2表達(dá)分布;軟件進(jìn)行圖像分析得出平均光密度值(Mean

7、 optical Density,MOD)。血清總膽紅素(Total bilirubin，TBIL)、直接膽紅素(Direct bilirubin，DBIL)、間接膽紅素(Indirect bilirubin，IBIL)指標(biāo)測(cè)定母血血清膽紅素濃度采用相應(yīng)膽紅素試劑盒（重氮法）測(cè)定。
　　4.數(shù)據(jù)分析:采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析數(shù)據(jù)。計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，對(duì)數(shù)據(jù)先進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)、方差齊性檢驗(yàn)，對(duì)于正態(tài)分布且

8、方差齊的數(shù)據(jù)采用單因素方差分析(one-factor ANOVA)三組間均數(shù)比較采用方差分析，兩兩比較采用SNK(Student-Newman-Keuls)檢驗(yàn)，亦稱(chēng)q檢驗(yàn)。若非正態(tài)或方差不齊采用非參數(shù)的秩和檢驗(yàn)Kruskal-Wallis H檢驗(yàn)。兩變量之間的相互關(guān)系采用直線相關(guān)性分析(Pearson相關(guān)性分析)，若不服從正態(tài)分布，則用Spearman秩相關(guān)。取α=0.05作為檢驗(yàn)水準(zhǔn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果

9、:
　　1.早發(fā)組、晚發(fā)組及正常對(duì)照組3組比較，HO-1在母血清、臍血清中3組分別進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05，P＜0.001)。在母血清、臍血清中HO-1濃度PE組均低于正常對(duì)照組(均P＜0.05)，早發(fā)組均低于晚發(fā)組(均P＜0.05)。與HO-1結(jié)果相同，在母血清、臍血清中HO-2濃度PE組均低于正常對(duì)照組(均P＜0.05)，早發(fā)組均低于晚發(fā)組(均P＜0.05)。
　　2.在母體血清、臍血分別進(jìn)行HO

10、-1與HO-2濃度組內(nèi)比較，在母體血清、臍血清中HO-1濃度均明顯高于相應(yīng)組HO-2濃度，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均＜0.001）。
　　3.IHC提示HO-1、HO-2在3組孕婦胎盤(pán)中均有表達(dá):HO-1、HO-2在胎盤(pán)組織中3組分別進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P＜0.001)，HO-1在PE組平均光密度值MOD低于對(duì)照組（均P＜0.001）。早發(fā)組與晚發(fā)組相比呈下降趨勢(shì)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。HO-2在PE組平

11、均光密度值MOD低于對(duì)照組（均P＜0.001），早發(fā)組低于晚發(fā)組(P＜0.05)。在3組組內(nèi)HO-1MOD值與HO-2進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P＞0.05)。
　　4.HE染色結(jié)果:對(duì)照組為正常妊娠胎盤(pán)，可見(jiàn)絨毛成熟良好，絨毛及絨毛間質(zhì)的血管豐富，形態(tài)正常，間質(zhì)少，絨毛最表層為細(xì)胞核排列較整齊的合體滋養(yǎng)層細(xì)胞;晚發(fā)重度子癇前期組胎盤(pán)絨毛成熟不良，絨毛表層的合體滋養(yǎng)層細(xì)胞細(xì)胞核排列紊亂，小動(dòng)脈平滑肌數(shù)量減少，彈力膜不完整

12、，可見(jiàn)玻璃樣變;早發(fā)型子癇前期組絨毛數(shù)量更少，絨毛明顯退變壞死，絨毛表面合體滋養(yǎng)層細(xì)胞大片融合，可見(jiàn)胎盤(pán)微血栓形成。
　　5.胎盤(pán)組織光鏡下觀察到HO-1主要表達(dá)于胎盤(pán)絨毛表層的合體滋養(yǎng)層細(xì)胞，胞漿胞膜均可見(jiàn)著色，胎膜細(xì)胞的胞膜上也有著色，絨毛間質(zhì)未見(jiàn)明顯著色;而HO-2表達(dá)部位與HO-1大致相同，在胎盤(pán)絨毛表層的合體滋養(yǎng)層細(xì)胞、胎膜細(xì)胞均可見(jiàn)棕色顆粒，亞細(xì)胞定位分別為胞漿、胞膜;HO-2還表達(dá)在血管內(nèi)皮細(xì)胞上，胞漿胞膜可見(jiàn)著色。

13、
　　6.HO-1的濃度與HO-2分別在母血清、臍血清和胎盤(pán)組織中呈正相關(guān)r及P值分別為(r=0.717，r=0.643，r=0.884;P均＜0.001)。
　　7.TBIL、DBIL及IBIL在3組間比較統(tǒng)計(jì)學(xué)無(wú)差異(P=0.914，P=0.134，P=0.434)。在母血清、臍血清及胎盤(pán)組織中HO-1濃度與TBIL、DBIL及IBIL均無(wú)相關(guān)性(P＞0.05); HO-2濃度在母血清中與TBIL、IBIL呈負(fù)相關(guān)(r=

14、-0.412，P=0.026; r=-0.495，P=0.006)，與DBIL無(wú)相關(guān)性（P＞0.05）;在臍血清中與膽紅素濃度均無(wú)相關(guān)性，在胎盤(pán)組織中與IBIL呈正相關(guān)性(r=0.725，P＜0.001)。
　　結(jié)論:
　　1.重度子癇前期孕婦母血、臍血及胎盤(pán)組織中HO-1及HO-2的濃度均下降，且早發(fā)組低于晚發(fā)組。證實(shí)HO參與子癇前期的發(fā)病，且與疾病的嚴(yán)重程度呈相關(guān)性。
　　2.重度子癇前期及正常妊娠孕婦母血及臍血中

15、HO-1的濃度高于HO-2，但胎盤(pán)組織HO-1與HO-2表達(dá)差異未得出有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義結(jié)論。
　　3.HO-1及HO-2在3組胎盤(pán)組織中均表達(dá)，HO-1主要表達(dá)于胎盤(pán)絨毛表層的合體滋養(yǎng)層細(xì)胞及胎膜細(xì)胞;HO-2除在胎盤(pán)絨毛表層的合體滋養(yǎng)層細(xì)胞、胎膜細(xì)胞表達(dá)外，也表達(dá)在血管內(nèi)皮細(xì)胞上。
　　4.血清膽紅素濃度3組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，血清膽紅素濃度與子癇前期的發(fā)病及病情嚴(yán)重程度無(wú)關(guān)。
　　5.母血清HO-2濃度與TBIL、I