MicroRNA-145在耐藥的上皮性卵巢癌中表達(dá)水平的相關(guān)研究.pdf

1、目的:卵巢癌（Ovary cancer，OC）是常見(jiàn)的女性生殖道惡性腫瘤之一，發(fā)病率占所有女性腫瘤的第六位。上皮性卵巢癌(epithilial ovary cancer，EOC)來(lái)源于卵巢表層上皮，是最常見(jiàn)的卵巢癌類(lèi)型，每年約有12萬(wàn)患者死于該腫瘤，居所有婦科腫瘤病死率第一位。上皮性卵巢癌的高死亡率主要是因?yàn)槠淙狈υ缙诘奶禺愋园Y狀和體征，超過(guò)70％的初診卵巢癌患者分期已為Ⅲ期或Ⅳ期，失去了最佳治療時(shí)機(jī)。如果卵巢癌在腫瘤仍局限在卵巢內(nèi)的早

2、期被發(fā)現(xiàn)，并采取積極治療，患者的5年生存率將大于90％。卵巢癌目前首選的治療方案為減瘤術(shù)聯(lián)合鉑類(lèi)為主的化療。盡管診斷和化療技術(shù)在不斷發(fā)展，但至今晚期患者的5年生存率僅為30％，且多數(shù)患者會(huì)復(fù)發(fā)并產(chǎn)生耐藥。那么，何為卵巢癌復(fù)發(fā)和耐藥的根源，何種細(xì)胞因子能抑制或促進(jìn)腫瘤的發(fā)生和發(fā)展呢？這是學(xué)者目前的研究熱點(diǎn)，但迄今為止仍未有突破性的進(jìn)展。
　　MicroRNAs（miRNAs）是一類(lèi)長(zhǎng)為18～24個(gè)核苷酸的內(nèi)源性非編碼的單鏈RNA分子

3、，廣泛存在生物體內(nèi)，在細(xì)胞的增殖、分化、凋亡及個(gè)體發(fā)育中發(fā)揮重要的作用。miRNA不編碼任何蛋白，通過(guò)降解或抑制兩種方式，負(fù)性調(diào)控靶基因的表達(dá)，進(jìn)而調(diào)控人類(lèi)約30％的基因表達(dá)。研究已證實(shí)miRNAs與腫瘤發(fā)生發(fā)展顯著相關(guān)，主要為腫瘤的增殖、凋亡、侵襲、轉(zhuǎn)移及其耐藥等。miRNAs突變、缺失和表達(dá)水平的異常是所有腫瘤共有的特征。在眾多miRNAs中，有些miRNAs具有“癌基因”的作用，有些miRNAs卻具有“抑癌基因”的作用，哪些發(fā)揮“

4、抑癌基因”作用的miRNAs能作用于靶基因，抑制腫瘤的發(fā)生發(fā)展，進(jìn)而逆轉(zhuǎn)腫瘤的復(fù)發(fā)和耐藥？MicroRNA145(miR-145)是microRNA家族中的一個(gè)亞型，研究證實(shí)miR-145為腫瘤抑制因子，可以抑制腫瘤干細(xì)胞的多能性進(jìn)而影響腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移侵襲，并認(rèn)為其低表達(dá)會(huì)減弱對(duì)其靶基因的調(diào)控作用進(jìn)而促進(jìn)腫瘤的發(fā)生，故它的表達(dá)缺失與腫瘤細(xì)胞的惡性行為有關(guān)。已有發(fā)現(xiàn)其與腫瘤的耐藥性密切相關(guān)，如miR-145與肺癌的耐藥存在相關(guān)性，但

5、是miR-145與卵巢癌的耐藥性的相關(guān)性卻未見(jiàn)報(bào)道。
　　本研究旨在通過(guò)檢測(cè)上皮性卵巢癌細(xì)胞株、耐藥細(xì)胞株及其移植瘤中miR-145的表達(dá)，探討miR-145與卵巢癌耐藥是否存在相關(guān)性，為后期進(jìn)一步研究轉(zhuǎn)染miR-145后能否抑制卵巢癌的耐藥提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)，進(jìn)而期待miR-145能夠成為一種腫瘤抑制劑，從而成為在惡性腫瘤的治療中的一種新的抗腫瘤途徑。
　　方法:
　　1.細(xì)胞培養(yǎng):人漿液性囊腺卵巢癌細(xì)胞系SKOV3和SK

6、OV3/DDP培養(yǎng)于含有10％胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基中，靜置于37℃，5％CO2，飽和濕度培養(yǎng)箱中。
　　2.構(gòu)建裸鼠移植瘤模型:常規(guī)體外培養(yǎng)非耐藥人卵巢漿液性囊腺癌細(xì)胞株SKOV3，耐藥細(xì)胞株SKOV3/DDP,待細(xì)胞覆蓋培養(yǎng)瓶底80％-90％時(shí)收集細(xì)胞，對(duì)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，制成5×107個(gè)/ml單細(xì)胞懸液，分別以每只裸鼠0.2ml（即1×107個(gè)細(xì)胞）于無(wú)菌條件下接種于裸鼠背側(cè)近后肢處的皮下。測(cè)量移植瘤的大小，在最長(zhǎng)徑

7、達(dá)0.5-0.8cm（10天左右）時(shí)將腫瘤取出，立即放入液氮罐中，備用。
　　3.RT-PCR檢測(cè):取未經(jīng)試劑固定、保存于-80℃冰箱的移植瘤組織，用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)上皮性卵巢癌細(xì)胞株、耐藥細(xì)胞株及其移植瘤中miR-145的表達(dá)水平，經(jīng)公式2-ΔΔCtmiR-145計(jì)算得到各個(gè)標(biāo)本中miR-145相對(duì)表達(dá)量。
　　4.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法:所得數(shù)據(jù)使用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件，采用Student's t檢驗(yàn)分析miR-145在普通

8、癌細(xì)胞與耐藥癌細(xì)胞間、移植瘤中普通癌細(xì)胞與耐藥癌細(xì)胞間及體外細(xì)胞與移植瘤中的表達(dá)差異，結(jié)果以(x)±s表示，其中P＜0.05被認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1.miR-145在SKOV3/DDP細(xì)胞中表達(dá)低于SKOV3細(xì)胞(0.45±0.07 vs1.09±0.16P＜0.05)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　2.miR-145在SKOV3/DDP裸鼠移植瘤中表達(dá)低于SKOV3裸鼠移植瘤（0.41±0.06 vs1.1

9、3±0.34 P＜0.05），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　3.miR-145在體外培養(yǎng)的SKOV3細(xì)胞中表達(dá)低于SKOV3裸鼠移植瘤（1.09±0.16 vs2.89±0.89 P＜0.05），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論:
　　1.無(wú)論在體內(nèi)還是體外培養(yǎng)的卵巢癌細(xì)胞中，miR-145在耐藥的卵巢癌細(xì)胞中表達(dá)量均較非耐藥卵巢癌細(xì)胞低，說(shuō)明miR-145與腫瘤的耐藥存在相關(guān)性，其表達(dá)水平的降低可能減弱對(duì)其靶基因的作用，從而導(dǎo)