AtaxiN-3的亞細胞定位及其對細胞器形態(tài)的影響.pdf

1、目的:本實驗通過研究野生型和polyQ擴展突變型ataxin-3蛋白在細胞內(nèi)的亞細胞定位及ataxin-3蛋白的polyQ擴展突變對線粒體、高爾基體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)形態(tài)的影響，以期更深入地了解ataxin-3的生物學功能及突變型ataxin-3蛋白的可能毒性作用機制。
　　方法:用Lipofectamine2000脂質(zhì)體將GFP-ataxin-3融合蛋白表達載體pEGFP-N1-MJD20Q/68Q轉(zhuǎn)染入Hela細胞。轉(zhuǎn)染24小時后采用間

2、接免疫熒光法用紅色熒光染料分別標記識別線粒體、高爾基體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜的標記蛋白TOM20、GM130、calnexin。在激光共聚焦顯微鏡下觀察ataxin-3蛋白是否與各細胞器共定位及ataxin-3蛋白的polyQ擴展突變對線粒體、高爾基體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)形態(tài)的影響。
　　結果:
　　1.ataxin-3蛋白與線粒體標記蛋白TOM20無共定位，但表達polyQ擴展型ataxin-3組線粒體碎裂細胞百分比增加(P＜0.05)。

3、　　2.ataxin-3蛋白與高爾基體標記蛋白GM130無共定位信號且擴展突變型ataxin-3也不引起高爾基體碎裂。
　　3.野生型和polyQ擴展型ataxin-3與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)標記蛋白calnexin均有部分共定位;擴展突變型ataxin-3與calnexin重疊信號較多，且重疊信號大多位于聚集體所在處。
　　結論:
　　1.polyQ擴展型ataxin-3蛋白可能間接損害線粒體完整性參與SCA3/MJD致病。