姜黃素對人肝L-02細(xì)胞膽固醇合成及轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白表達(dá)的影響.pdf

1、目的:研究姜黃素對人肝L-02細(xì)胞脂滴形成、膽固醇合成限速酶-HMG-CoA還原酶和轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白Caveolin-1表達(dá)及細(xì)胞內(nèi)膽固醇、膽固醇酯含量的影響,了解姜黃素對肝細(xì)胞膽固醇合成及轉(zhuǎn)運(yùn)的作用。
　　方法:取正常人肝L-02細(xì)胞,和經(jīng)50％胎牛血清造模24小時建立的脂變肝細(xì)胞模型,共同作為研究對象。實(shí)驗(yàn)分為7組:第一組為空白對照,即正常肝細(xì)胞組;第二組為脂變肝細(xì)胞組;第三組至第六組在脂變細(xì)胞中分別加入不等量姜黃素,使姜黃素終濃度分

2、別為0、12.5umol/l、25umol/l、50umol/l和100umol/l;第七組為陽性對照組,即脂變肝細(xì)胞加入普羅布考,使其終濃度為50umol/l;第八組為正常肝細(xì)胞加50umol/l姜黃素對照組。每組加藥后繼續(xù)孵育24小時。油紅O染色觀察每組細(xì)胞內(nèi)脂滴的形成情況。高效液相色譜法(HPLC)檢測細(xì)胞內(nèi)膽固醇(TC)、游離膽固醇(FC)和膽固醇酯(CE)的含量,并計算細(xì)胞內(nèi)CE/TC比值及培養(yǎng)基FC含量。RT-PCR法檢測每

3、組肝細(xì)胞HMG-CoA還原酶及轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白caveolin-1 mRNA水平的表達(dá),從而確定姜黃素降低細(xì)胞CE的最佳濃度,作出量效關(guān)系。然后以姜黃素的最佳濃度處理細(xì)胞不同的時間,即0小時、6小時、12小時、24小時,再分別檢測各組細(xì)胞HMG-CoA還原酶和caveolin-1 mRNA水平的表達(dá),高效液相色譜法檢測細(xì)胞膽固醇含量,確定姜黃素降低細(xì)胞CE的最佳時間,作出時效關(guān)系。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以±s表示,用SPSS13.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析

4、,以P<0.05作為差異顯著性標(biāo)準(zhǔn)。
　　結(jié)果:經(jīng)50%胎牛血清孵育24小時后,倒置顯微鏡下可觀察到L-02細(xì)胞脂肪變性,胞漿內(nèi)充滿大量可被油紅O紅染的脂滴,且高效液相色譜法檢測細(xì)胞內(nèi)外膽固醇含量均明顯增加(P﹤0.05),示脂變肝細(xì)胞模型成功建立。經(jīng)不同濃度的姜黃素(0umol/l、12.5umol/l、25umol/l、50umol/l、100umol/l)處理脂變肝細(xì)胞24小時,結(jié)果顯示:油紅O染色表明,細(xì)胞內(nèi)脂滴較處理前減

5、少。姜黃素呈濃度依賴性的降低脂變肝細(xì)胞細(xì)胞內(nèi)TC、CE,增加培養(yǎng)基中FC含量,同時呈濃度依賴性的減少 HMG-CoA還原酶的表達(dá)、增加 caveolin-1 mRNA的表達(dá)。將100umol/l的姜黃素與脂變肝細(xì)胞共同處理0,6,12,24小時,結(jié)果顯示:細(xì)胞內(nèi)脂滴呈時間依賴性減少;姜黃素呈時間依賴性的降低脂變細(xì)胞內(nèi)TC、CE,增加培養(yǎng)基中FC含量,同時呈時間依賴性的減少HMG-CoA還原酶的表達(dá)、增加caveolin-1mRNA的表達(dá)