人腸道菌群PCR-DGGE方法的建立及脾虛患者的研究.pdf

1、脾虛證是臨床常見的一類中醫(yī)證候，是慢性消化系統(tǒng)疾病的主要證型。研究證實(shí)，脾虛證與腸道菌群的變化密切相關(guān)。本研究通過對健康受試者和臨床脾虛證患者腸道菌群研究，考察年齡和性別對健康人群腸道菌結(jié)構(gòu)變化的影響以及脾虛證與腸道菌群的關(guān)系，初步建立脾虛證的腸道菌群分子特征，為進(jìn)一步深刻理解中醫(yī)“脾虛證”的實(shí)質(zhì)和脾虛證的臨床診斷提供新的思路和方法。 本研究采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerasechainreaction，PCR)及變性梯度凝

2、膠電泳(denaturinggradientgelelectrophoresis，DGGE)技術(shù)構(gòu)建人腸道菌群16SrDNA指紋圖譜，并對其分析方法進(jìn)行了優(yōu)化。在此基礎(chǔ)上，分別比較了不同年齡和不同性別的健康人群腸道菌結(jié)構(gòu)的差異，以及健康人群和老年男性脾虛證患者(脾陽虛、脾氣虛、脾陽虛兼脾氣虛)腸道菌群基因指紋圖譜的差異。通過對脾虛證特征條帶指認(rèn)以及健康人群與脾虛證患者之間、不同類型脾虛證患者(脾陽虛、脾氣虛、脾陽虛兼脾氣虛)間腸道菌結(jié)構(gòu)

3、的相似性分析(包括非加權(quán)配對算術(shù)平均法聚類分析、多維尺度分析和主成分分析)的方法確定脾虛證患者腸道菌群基因指紋特征，從而揭示脾虛證與腸道菌群的關(guān)系。 結(jié)果表明，性別差異不會造成腸道菌群結(jié)構(gòu)明顯差異，而年齡差異則與腸道菌群的結(jié)構(gòu)改變有一定關(guān)聯(lián)。脾陽虛、脾氣虛和脾陽虛兼脾氣虛患者的腸道菌群結(jié)構(gòu)具有明顯差異，非加權(quán)配對算術(shù)平均法聚類分析、多維尺度分析和主成分分析均能對其按腸道菌群結(jié)構(gòu)差異進(jìn)行區(qū)分，與臨床診斷結(jié)果基本一致。經(jīng)比較初步確定

4、脾虛證患者16SrDNADGGE特征條帶1條，2條脾陽虛患者差異性特征條帶和1條脾氣虛患者差異性特征條帶。此外同一證侯組中不同病癥、臨床表征和病程的患者腸道菌群結(jié)構(gòu)明顯不同。診斷為腸易激綜合癥(IBS)的脾虛患者與診斷為非腸易激綜合癥(包括診斷為其它消化系統(tǒng)疾病和非消化系統(tǒng)疾病)的脾虛患者的菌群結(jié)構(gòu)有明顯差異；臨床表征相似的脾虛患者腸道菌群結(jié)構(gòu)也較為相似；而病程相差懸殊的脾虛患者，其腸道菌群結(jié)構(gòu)也有明顯差異。 綜上，腸道菌群的基