豬大腸桿菌病原性腹瀉IgY抗體口服微膠囊的制備及其緩釋效果評(píng)價(jià).pdf

1、腸毒素大腸桿菌(Enterotoxigenic Escherichia Coli:ETEC)感染引起仔豬腹瀉腸道傳染病。此病不僅嚴(yán)重影響仔豬的生長(zhǎng)發(fā)育、而且導(dǎo)致高死亡率。由ETEC引起仔豬腹瀉發(fā)病率約占引起仔豬腹瀉病原的40％，其爆發(fā)嚴(yán)重危害養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展。本研究初步開發(fā)一種產(chǎn)毒素大腸大腸桿菌的IgY殼聚糖．海藻酸鈉微膠囊，通過口服，被腸道吸收后，發(fā)揮被動(dòng)免疫作用，對(duì)該病進(jìn)行預(yù)防及治療。 1、將產(chǎn)腸毒素埃希氏大腸桿菌(ETEC)K

2、88，K99，987P標(biāo)準(zhǔn)菌株混合，分別與油乳劑、蜂膠、氫氧化鋁膠三種免疫佐劑混合，用該三種佐劑對(duì)隨機(jī)分組的健康產(chǎn)蛋雞進(jìn)行首免、二免、三免間隔分別為14天(d)及31天(d)免疫，摸索卵黃抗體的消長(zhǎng)規(guī)律。經(jīng)過比較發(fā)現(xiàn)，以油乳劑作為免疫佐劑，對(duì)產(chǎn)蛋雞進(jìn)行首免、二免、三免問隔30d的免疫方案，能產(chǎn)生較高效價(jià)的IgY抗體，且維持時(shí)間較長(zhǎng)。收集此lgY抗體，進(jìn)行去脂純化。選用水稀釋法、氯仿抽提法，正辛酸-硫酸銨共沉淀法三種方法進(jìn)行純化效果的比較

3、。以IgY純化的效果、純化后的活性、回收率、含量作為指標(biāo)，發(fā)現(xiàn)以水稀釋法進(jìn)行去脂，硫酸銨除雜蛋白效果最為理想，價(jià)格低廉，適宜大規(guī)模生產(chǎn)。 2、豬源大腸桿菌IgY殼聚糖-海藻酸鈉(ACS)微膠囊制備條件的探討，主要分為兩部分：第一部分篩選成囊性好且膜強(qiáng)度適中，適合進(jìn)行胃腸控釋的殼聚糖-海藻酸鈉的空白微膠囊最佳成囊條件，經(jīng)單因素試驗(yàn)對(duì)主要影響成囊條件的兩個(gè)因素：海藻酸鈉及氯化鈣的濃度進(jìn)行篩選。并以影響微膠囊膜強(qiáng)度的因素為條件，以微膠

4、囊經(jīng)人工胃液(3h)-人工腸液(7h)膨脹系數(shù)為研究對(duì)象，進(jìn)行正交實(shí)驗(yàn)L9(43)，初步確定成囊效果，緩釋性最好的制備條件為：0.2-0.4％混合分子量的殼聚糖溶液中加入氯化鈣(CaCl2)，使CaCl2的濃度為1-2％，并調(diào)節(jié)pH到4-6，1-3％海藻酸鈉，反應(yīng)時(shí)間15min，37℃晾干3h。第二部分，把IgY按上述條件進(jìn)行包囊，研究該微膠囊對(duì)IgY的最大包封濃度，經(jīng)測(cè)定IgY在殼聚糖-海藻酸鈉微膠囊中的最高包封濃度為75％。