維康顆粒對腫瘤相關(guān)性疲勞小鼠的影響及機(jī)制研究.pdf

1、近年來，隨著乳腺癌的診療技術(shù)的進(jìn)步以及人們自我保健意識的加強(qiáng)，乳腺癌患者的死亡率正逐漸下降，生活中經(jīng)歷過或正在經(jīng)歷乳腺癌的人們越來越多。腫瘤相關(guān)性疲勞(cancer related fatigue，CRF)的產(chǎn)生與癌癥或癌癥的治療相關(guān)，并且干擾患者正常生活，極大地影響了癌癥患者的生活質(zhì)量。因此，如何提高這部分日益增多的人群的生活質(zhì)量就變得十分重要。
　　 目前， CRF越來越引起國內(nèi)外學(xué)者的關(guān)注，但CRF發(fā)生的病理生理學(xué)機(jī)制仍然

2、不是很清楚?，F(xiàn)代西醫(yī)學(xué)臨床上仍缺乏有效的干預(yù)手段，這為中醫(yī)藥干預(yù)CRF提供了展示的機(jī)遇。CRF的治療要立足于腫瘤疾病本身，中醫(yī)認(rèn)為正氣不足是腫瘤發(fā)生的內(nèi)在根本原因，氣血陰陽失衡、臟腑功能紊亂是它的病理基礎(chǔ)，其基本病理變化除正氣虧虛外，更有氣滯、血瘀、痰結(jié)、濕聚、熱毒等相互糾結(jié)，日久積滯而成有形之腫塊。CRF是在腫瘤的基礎(chǔ)上形成的。因此，可認(rèn)為CRF是一種病因明確，治療多變，以虛損為主，夾有實(shí)邪的病證，病理屬性總屬本虛標(biāo)實(shí);正氣不足，毒瘀

3、內(nèi)存為其基本病機(jī)。因此中醫(yī)藥干預(yù)CRF在盡可能消除疲勞相關(guān)原因之外，還應(yīng)強(qiáng)調(diào)中醫(yī)的扶正與祛邪相輔相成，辨證論治，重視整體調(diào)節(jié)，立足于補(bǔ)養(yǎng)脾腎，行氣祛瘀。中醫(yī)理論指出:“脾為后天之本，氣血生化之源，主肌肉四肢”、“肝藏血，肝主筋，為罷極之本”、“腎為先天之本，生命之根，主骨生髓，為作強(qiáng)之官，伎巧出焉”。故認(rèn)為疲勞與中醫(yī)肺、脾、肝、腎功能失調(diào)密切相關(guān)。在此理論基礎(chǔ)上，本課題組研制出防治疲勞的中藥復(fù)方——維康顆粒，從肺、脾、肝、腎著手，具有滋

4、補(bǔ)肝腎、健脾潤肺、益氣養(yǎng)陰之功效，從而通過多種途徑改善疲勞，提高人的生活質(zhì)量。
　　 因此，本論文從主補(bǔ)肝脾腎，兼以理氣祛瘀著手，選擇維康顆粒，用其在乳腺癌小鼠模型上進(jìn)行干預(yù)CRF的相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究，以期為臨床運(yùn)用維康顆粒干預(yù)CRF提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，并揭示其作用機(jī)制。
　　 目的：
　　 通過建立乳腺癌小鼠CRF模型，評價(jià)自制中藥復(fù)方維康顆粒對由腫瘤本身及腫瘤化療所引起的乳腺癌小鼠CRF的作用，并明確中藥復(fù)方維康顆粒緩解

5、CRF的代謝組學(xué)機(jī)制及緩解化療引起的相關(guān)性疲勞的基因組學(xué)機(jī)制。
　　 方法：
　　 1.維康顆粒緩解CRF的代謝組學(xué)機(jī)制:
　　 實(shí)驗(yàn)前，將所有雌性BALB/c小鼠置于游泳箱適應(yīng)性游泳訓(xùn)練2天，5 min/天，水溫25℃±1℃。剔除游泳時(shí)間過長和過短的小鼠以及過于興奮和過于安靜的小鼠。然后，隨機(jī)抽取10只小鼠作為正常對照(NS，po，20 ml/kg，qd)組，剩余小鼠為待制備乳腺癌小鼠CRF模型組。將1×105

6、cells/ml的4T1乳腺癌細(xì)胞接種于小鼠右側(cè)腹壁第4對乳房脂肪墊區(qū)域的皮下，制備乳腺癌小鼠CRF模型。當(dāng)瘤塊長到50 mm3～100 mm3（接種后第7天）的時(shí)候，按瘤體積隨機(jī)分為4組，每組10只，分別為腫瘤對照(NS，po，20 ml/kg，qd)組、紫杉醇(PTX，ip，10 mg/kg，q2d)組、維康顆粒(WKKL，po，6 g/kg，qd)組、維康顆粒+紫杉醇(WKKL，po，6 g/kg，qd;PTX，ip，10 mg/

7、kg，q2d)組。上述5組小鼠分別進(jìn)行以下幾個(gè)方面的實(shí)驗(yàn):
　　 (1)維康顆粒對荷瘤小鼠的一般情況的影響:觀察實(shí)驗(yàn)過程中各組小鼠的體重、精神狀態(tài)、活動(dòng)情況、飲食以及皮毛外觀變化。每周對上述小鼠的一般情況進(jìn)行一次評價(jià)。
　　 (2)維康顆粒對荷瘤小鼠的行為學(xué)影響:給藥的第12天對所有小鼠進(jìn)行曠場實(shí)驗(yàn)。主要觀察小鼠在實(shí)驗(yàn)箱內(nèi)的總運(yùn)動(dòng)距離、外周格運(yùn)動(dòng)距離、中央格運(yùn)動(dòng)距離、理毛次數(shù)、大便粒數(shù)、爬壁次數(shù)。于末次給藥后30min，

8、觀察小鼠6min內(nèi)的懸尾不動(dòng)時(shí)間。
　　 (3)維康顆粒的對荷瘤小鼠的生存時(shí)間的影響:末次藥后，不再給予任何干預(yù)措施，動(dòng)態(tài)觀察荷瘤小鼠生存時(shí)間，并計(jì)算各組小鼠的中位生存時(shí)間、平均生存時(shí)間及生命延長率。
　　 (4)維康顆粒對荷瘤小鼠的抗疲勞作用:于開始給藥前、給藥后的第10天、第20天，用7％體重的鉛墜系于小鼠尾部，將小鼠放入水溫25℃±1℃的游泳箱中進(jìn)行力竭游泳測試，并記錄力竭游泳時(shí)間。
　　 (5)維康顆粒對

9、荷瘤小鼠腫瘤生長的抑制作用:另取上述4組荷瘤小鼠，各組小鼠自接受治療開始，每3天測量腫瘤體積。在末次給藥1小時(shí)后，摘眼球采血，分離血漿，置-80℃保存，用于代謝組學(xué)研究。并剝離瘤塊并稱重，計(jì)算抑瘤率。
　　 (6)維康顆粒對荷瘤小鼠臟器指數(shù)的影響:取前一實(shí)驗(yàn)中分離并稱重的脾臟、胸腺、腎上腺等器官，按對應(yīng)的每只小鼠的體重計(jì)算臟器指數(shù)。
　　 (7)維康顆粒對乳腺癌小鼠CRF血漿代謝組學(xué)的研究:應(yīng)用核磁共振氫譜(1H-NMR

10、)技術(shù)獲取前面實(shí)驗(yàn)中小鼠血漿中的原始代謝指紋圖譜信息，通過數(shù)據(jù)采集處理獲得各樣本數(shù)據(jù)信息，采用多元數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)方法(PCA、PLS-DA、OPLS-DA)模式識別等方法進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，得到5組小鼠血漿代謝概況，并進(jìn)行組間兩兩比較。最后結(jié)合模型VIP值、歸一化積分值篩選出兩兩組間小鼠血漿有差異的代謝物（潛在分子標(biāo)志物），結(jié)合數(shù)據(jù)庫和文獻(xiàn)進(jìn)行代謝物鑒定，并分析相關(guān)代謝途徑變化，揭示乳腺癌小鼠CRF的發(fā)生機(jī)制、WKKL緩解乳腺癌小鼠CRF的作用機(jī)制

11、。
　　 2.維康顆粒緩解化療引起的相關(guān)性疲勞的基因組學(xué)機(jī)制:
　　 另取25只雌性BALB/c小鼠置于小鼠于游泳箱（高30 cm，直徑25 cm）適應(yīng)性游泳訓(xùn)練2天，5 min/天，水溫25℃±1℃。剔除游泳時(shí)間過長和過短的小鼠以及過于興奮和過于安靜的小鼠。按游泳時(shí)間隨機(jī)分為3組，每組6只，共18只。分別為正常對照(NS，po，20 ml/kg，qd)組、紫杉醇(PTX，ip，10 mg/kg，q2d)組、維康顆粒+紫

12、杉醇(WKKL，po，6 g/kg，qd;PTX，ip，10 mg/kg，q2d)組。上述3組小鼠分別進(jìn)行以下幾個(gè)方面的實(shí)驗(yàn):
　　 (1)維康顆粒對化療小鼠的一般情況的影響:觀察實(shí)驗(yàn)過程中各組小鼠的體重、精神狀態(tài)、活動(dòng)情況、飲食以及皮毛外觀變化。每周對上述小鼠的一般情況進(jìn)行一次評價(jià)。
　　 (2)維康顆粒對化療小鼠的抗疲勞作用:于開始給藥前、給藥后的第7天、第14天，用7％體重的鉛墜系于小鼠尾部，將小鼠放入水溫25℃±

13、1℃的游泳箱中進(jìn)行力竭游泳測試，并記錄力竭游泳時(shí)間。
　　 (3)維康顆粒對化療小鼠骨骼肌基因組學(xué)的研究:應(yīng)用基因芯片技術(shù)獲取前面實(shí)驗(yàn)中小鼠骨骼肌中的原始基因信息，應(yīng)用Affmetrix的GCOSvl.4(genechip operating software versionl.4)對熒光信號的強(qiáng)度和比值進(jìn)行計(jì)算和統(tǒng)計(jì)分析，得到各芯片的單張分析結(jié)果，對芯片進(jìn)行質(zhì)量控制處理。用SAM(significant analysis of

14、 microarray)分析法，總體比較PTX組與正常對照組，PTX組與WKKL+PTX組間的基因表達(dá)有無顯著性差異。結(jié)合數(shù)據(jù)庫和文獻(xiàn)進(jìn)行基因成分、功能、進(jìn)程鑒定，并分析相關(guān)通路變化，揭示化療相關(guān)性疲勞的發(fā)生機(jī)制、WKKL緩解化療相關(guān)性疲勞的作用機(jī)制。
　　 結(jié)果
　　 1.維康顆粒緩解CRF的代謝組學(xué)機(jī)制:
　　 (1)維康顆粒對荷瘤小鼠的一般情況的影響:給藥干預(yù)前，5組小鼠之間的精神狀態(tài)、活動(dòng)情況、飲食以及皮

15、毛外觀等一般情況未見有顯著差別。各組小鼠均活潑好動(dòng)，皮毛光潔整齊，眼睛有神，對食物敏感，逃避反應(yīng)快。整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間，NC組小鼠均保持活潑好動(dòng)、皮毛光潔整齊、對食物敏感、逃避快。與NC組的小鼠比較，其余4組荷瘤小鼠均逐漸出現(xiàn)毛發(fā)稀疏、不活潑、行動(dòng)遲緩和進(jìn)食減少等現(xiàn)象。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，4組荷瘤小鼠的一般情況從差到相對較好依次為PTX組、TC組、WKKL+PTX組、WKKL組。干預(yù)前，各組小鼠的體重?zé)o顯著差別(F=0.100，P=0.982)。NC

16、組小鼠的體重逐漸增加。而隨著腫瘤的生長，在干預(yù)2周和第3周時(shí)，TC組小鼠的體重均較NC組顯著減輕(P=0.000)、PTX組小鼠的體重均較TC組顯著減輕（P＜0.05～0.01）、WKKL+PTX組小鼠的體重較PTX組顯著增加（P＜0.05～0.01）。
　　 (2)維康顆粒對荷瘤小鼠的行為學(xué)影響:①曠場實(shí)驗(yàn)結(jié)果:TC組、PTX組小鼠的5min內(nèi)的總運(yùn)動(dòng)距離（PTC組=0.014、PPTX組=0.003）、外周格運(yùn)動(dòng)距離（PTC

17、組=0.000、PPTX組=0.000）較NC組小鼠均顯著減少。而WKKL+PTX組小鼠的外周格運(yùn)動(dòng)距離較TC組(P=0.006)、PTX組(P=0.044)小鼠顯著增加。TC組小鼠較NC組小鼠的爬壁次數(shù)顯著減少(P=0.039)、理毛次數(shù)顯著減少(P=0.006)。PTX組小鼠較TC組小鼠的大便粒數(shù)顯著減少(P=0.000)、爬壁次數(shù)顯著減少(P=0.003)。WKKL+PTX組小鼠較TC組小鼠的大便粒數(shù)顯著減少(P=0.000);

18、WKKL+PTX組小鼠的大便粒數(shù)較PTX組增加，但是無顯著意義。②懸尾實(shí)驗(yàn)結(jié)果:與NC組小鼠相比，TC組小鼠的不動(dòng)時(shí)間有所延長，但無顯著差異(P=0.308)。與TC組小鼠比較， WKKL組(P=0.004)、WKKL+PTX組（P=0.001）小鼠的不動(dòng)時(shí)間顯著縮短。
　　 (3)維康顆粒的對荷瘤小鼠的生存時(shí)間的影響:與TC組比較，PTX組(P=0.043)、WKKL組(P=0.007)、WKKL+PTX組(P=0.000)小

19、鼠的中位生存時(shí)間及平均生存時(shí)間均顯著延長。與PTX組比較，WKKL+PTX組小鼠的中位生存時(shí)間及平均生存時(shí)間均顯著延長(P=0.039)。與TC組小鼠相比，WKKL+PTX組、WKKL組和PTX組3組小鼠的生命延長率分別為21.61％、13.07％和8.54％。
　　 (4)維康顆粒對荷瘤小鼠的抗疲勞作用:①同一時(shí)間點(diǎn)各組小鼠力竭游泳時(shí)間的比較:干預(yù)前，5組小鼠的力竭游泳時(shí)間無顯著差異(P=0.992)。干預(yù)第10天時(shí)，與NC組

20、比較，荷瘤小鼠的力竭游泳時(shí)間顯著減少（P＜0.01）:與TC組比較，NC組小鼠的力竭游泳時(shí)間顯著延長(P=0.000)，PTX組小鼠的力竭游泳時(shí)間顯著減少(P=0.014)、而WKKL組（P=0.381）、WKKL+PTX組(P=0.717)的游泳時(shí)間與之相比無顯著差異。與PTX組比較，其余4組小鼠的力竭游泳時(shí)間顯著延長（P＜0.05～0.01)。干預(yù)20天時(shí)，與NC組比較，荷瘤組小鼠的力竭游泳時(shí)間顯著減少（P＜0.01)。與TC組比較

21、，NC組小鼠的力竭游泳時(shí)間顯著延長(P=0.000)，而PTX組、WKKL組、WKKL+PTX組的游泳時(shí)間無顯著差異(P＞0.05)。與PTX組比較，NC組、WKKL組、WKKL+PTX組小鼠的力竭游泳時(shí)間顯著延長（P＜0.05～0.01)。②不同時(shí)間點(diǎn)的同組小鼠力竭游泳時(shí)間比較:NC組小鼠與干預(yù)前比較，干預(yù)第10天(P=0.000)、干預(yù)第20天(P=0.000)的游泳時(shí)間顯著延長;與干預(yù)第10天比較，干預(yù)第20天時(shí)小鼠的游泳時(shí)間顯著

22、延長(P=0.004)。TC組小鼠與干預(yù)前比較，干預(yù)第10天(P=0.015)，干預(yù)第20天的游泳時(shí)間均顯著下降(P=0.000);與干預(yù)第10天比較，干預(yù)第20天時(shí)小鼠的游泳能力顯著下降(P=0.000)。PTX組小鼠與干預(yù)前比較，干預(yù)第10天(P=0.000)、干預(yù)第20天(P=0.000)的游泳時(shí)間均顯著下降;與干預(yù)第10天比較，干預(yù)第20天時(shí)小鼠的游泳能力顯著下降（P=0.000）。WKKL組小鼠與干預(yù)前比較，干預(yù)第10天小鼠的

23、游泳能力均呈現(xiàn)下降的趨勢（P=0.241），但無顯著變化，干預(yù)第20天時(shí)小鼠的游泳能力顯著下降（P=0.007）;與干預(yù)第10天比較，干預(yù)第20天時(shí)小鼠的游泳能力無顯著變化(P=0.638)。WKKL+PTX組小鼠與干預(yù)前比較，干預(yù)第10天（P=0.051）時(shí)小鼠的游泳能力無顯著下降，干預(yù)第20天時(shí)小鼠的游泳能力顯著下降(P=0.039);與干預(yù)第10天比較，干預(yù)第20天時(shí)小鼠的游泳能力無顯著變化(P=0.464)。
　　 (5

24、)維康顆粒對荷瘤小鼠腫瘤生長的抑制作用:實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，與TC組比較，WKKL+PTX組(P=0.007)、PTX組(P=0.037)的瘤重均顯著減輕。與TC組比較，WKKL+PTX組、WKKL組、PTX組的腫瘤體積顯著變小（P＜0.05～0.01）。WKKL+PTX組、WKKL組和PTX組3組小鼠的抑瘤率分別為22.24％、15.36％和16.89％。
　　 (6)維康顆粒對荷瘤小鼠臟器指數(shù)的影響:①脾指數(shù):與NC組比較，其余4組

25、的脾指數(shù)均顯著升高（P＜0.01）。與TC組比較，PTX組、WKKL組、WKKL+PTX組的脾指數(shù)無顯著差異(P＞0.05)。與PTX組比較，WKKL組、WKKL+PTX組的脾指數(shù)無顯著差異（P＞0.05）。②胸腺指數(shù):與NC組比較，其余4組的胸腺指數(shù)顯著下降（P＜0.01）。與TC組比較，PTX組的胸腺指數(shù)顯著下降（P=0.001），WKKL組(P=0.460)、WKKL+PTX組(P=0.588)小鼠的胸腺指數(shù)無顯著差異。與PTX組

26、比較，WKKL組(P=0.010)、WKKL+PTX組(P=0.006)小鼠的胸腺指數(shù)顯著升高。③腎上腺指數(shù):與NC組比較，TC組、PTX組的腎上腺指數(shù)顯著升高（P＜0.01)。與TC組比較，WKKL+PTX組小鼠的腎上腺指數(shù)顯著降低(P=0.037)。與PTX組比較，WKKL組、WKKL+PTX組小鼠的腎上腺指數(shù)無顯著差異(P＞0.05)。
　　 (7)維康顆粒對乳腺癌小鼠CRF血漿代謝組學(xué)的研究:①五組小鼠之間血漿NMR的分

27、析:用PLS-DA模型，最終計(jì)算出5組小鼠血漿樣本共有2個(gè)主成分，5組之間基本分離，且各組相關(guān)集中，組間可基本區(qū)分。②NC組與TC組組間兩兩比較:采用PCA、PLS-DA方法進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和模式識別后，TC組和NC組各自集中，兩組可完全區(qū)分。進(jìn)一步用OPLS-DA模型處理數(shù)據(jù)后，兩組樣本集中趨勢更顯著，分類效果更好。綜合載荷矩陣圖、S圖、VIP值、歸一化積分值共篩選得到16個(gè)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的變量（P＜0.05～0.01)。與NC組小鼠比較，

28、TC組小鼠血漿中的乳酸、甘油磷酸酯、精胺、亮氨酸、丙氨酸、葡萄糖-6-磷酸、3-羥基丁酸水平升高，肌醇、磷酸膽堿、輔酶A、辛酰甘氨酸、3-羥基異戊酸、神經(jīng)酸、甲基丙二酸、天冬氨酸水平下降。③TC組與PTX組小鼠組間兩兩比較:采用PCA、PLS-DA方法進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和模式識別后，TC組和PTX組各自集中，兩組可完全區(qū)分。進(jìn)一步用OPLS-DA模型處理數(shù)據(jù)后，兩組樣本集中趨勢更顯著，兩組小鼠兩組樣本之間顯著區(qū)分，但PTX組樣本之間較TC組分

29、散。綜合載荷矩陣圖、S圖、VIP值、歸一化積分值共篩選得到13個(gè)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的變量（P＜0.05～0.01)。與TC組小鼠比較，PTX組小鼠血漿中的瓜氨酸水平升高，肌醇、磷酸膽堿、異檸檬酸、甘油磷酸酯、亞油酸、谷氨酰胺、輔酶A、天冬氨酸、絲氨酸、高半胱氨酸、赤蘚糖水平下降。④TC組與WKKL組組間兩兩比較:采用PCA、PLS-DA方法進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和模式識別后，TC組和WKKL組各自集中，兩組可完全區(qū)分。進(jìn)一步用OPLS-DA模型處理數(shù)據(jù)

30、后，兩組樣本集中趨勢更顯著，分類效果更好。綜合載荷矩陣圖、S圖、VIP值、歸一化積分值共篩選得到1個(gè)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的變量（P＜0.05～0.01）。與TC組小鼠比較，WKKL組小鼠血漿中的甘油磷酸酯水平升高。⑤TC組與WKKL+PTX組組間兩兩比較:采用PCA、PLS-DA方法進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和模式識別后，TC組和WKKL+PTX組各自集中，兩組可完全區(qū)分。進(jìn)一步用OPLS-DA模型處理數(shù)據(jù)后，兩組樣本集中趨勢更顯著，分類效果更好。綜合載荷矩

31、陣圖、S圖、VIP值、歸一化積分值共篩選得到17個(gè)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的變量（P＜0.05～0.01）。與TC組小鼠比較，WKKL+PTX組小鼠血漿中的的肌醇、二羥基丙酮、磷酸膽堿、亞精胺、3-羥基丁酸、丙二酸、天冬氨酸、絲氨酸、L-纈氨酸、丙酮酸、琥珀酸半醛、氨基己酸、β-丙氨酸水平下降，丙酰甘氨酸、瓜氨酸、異亮氨酸、辛酰甘氨酸、2-羥基丁酸水平升高。⑥PTX組與WKKL+PTX組組間兩兩比較:采用PCA、PLS-DA方法進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和模式識

32、別后，PTX組和WKKL+PTX組各自集中，兩組可完全區(qū)分。進(jìn)一步用OPLS-DA模型處理數(shù)據(jù)后，兩組樣本集中趨勢更顯著，分類效果更好。綜合載荷矩陣圖、S圖、VIP值、歸一化積分值共篩選得到5個(gè)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的變量（P＜0.05～0.01）。與PTX組小鼠比較，WKKL+PTX組小鼠血漿中的神經(jīng)酸、輔酶A、磷酸烯醇丙酮酸、肌醇、赤蘚糖水平升高。⑦WKKL組與WKKL+PTX組組間兩兩比較:采用PCA、PLS-DA方法進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和模式識別

33、后，WKKL組和WKKL+PTX組兩組分離趨勢增強(qiáng)，但仍存在一定的重疊，兩組尚未能完全區(qū)分開來。進(jìn)一步用OPLS-DA模型處理數(shù)據(jù)后，兩組樣本集中趨勢更顯著，分類效果更好。綜合載荷矩陣圖、S圖、VIP值、歸一化積分值共篩選得到12個(gè)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的變量（P＜0.05～0.01）。與WKKL組小鼠比較，WKKL+PTX組小鼠血漿中的丙酰甘氨酸、瓜氨酸、甘油磷酸酯、2-羥基丁酸、辛酰甘氨酸、異亮氨酸、皮質(zhì)酮、異阿魏酸、四氫葉酸、苯丙氨酸、丙氨

34、酸水平升高，磷酸膽堿水平下降。
　　 2.維康顆粒緩解化療引起的相關(guān)性疲勞的基因組學(xué)機(jī)制:
　　 (1)維康顆粒對化療小鼠的一般情況的影響:給藥干預(yù)前，3組小鼠之間的精神狀態(tài)、活動(dòng)情況、飲食以及皮毛外觀等一般情況未見有顯著差別。各組小鼠均活潑好動(dòng)，皮毛光潔整齊，眼睛有神，對食物敏感，逃避反應(yīng)快。整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中，NC組小鼠的上述情況未有顯著變化。與NC組的小鼠比較，其余2組化療小鼠均逐漸出現(xiàn)毛發(fā)稀疏、聚集、不活潑、行動(dòng)遲緩

35、和進(jìn)食減少等現(xiàn)象，但WKKL+PTX組小鼠的一般情況較PTX組要好。干預(yù)前，各組小鼠的體重?zé)o顯著差別(F=0.066，P=0.936)。NC組小鼠的體重逐漸增加，干預(yù)7天時(shí)，NC組小鼠的體重較干預(yù)前顯著增加（P=0.002），PTX組小鼠體重較干預(yù)前減少、WKKL+PTX組小鼠體重較干預(yù)前增加，但是無顯著差異。與PTX組小鼠體重相較，NC組（P=0.001），WKKL+PTX組(P=0.002)均有顯著性差異。干預(yù)14天時(shí)，NC組及WK

36、KL+PTX組小鼠的體重較干預(yù)前顯著增加（P＜0.05～0.01），但較干預(yù)1周時(shí)無顯著增加。PTX組小鼠的體重較干預(yù)前(P=0.009)、干預(yù)7天(P=0.008)時(shí)均顯著減輕。與PTX組小鼠體重比較，NC組(P=0.000)、WKKL+PTX組（P=0.000）的小鼠體重均分別有顯著差異。
　　 (2)維康顆粒對化療小鼠的抗疲勞作用:①同一時(shí)間點(diǎn)各組小鼠力竭游泳時(shí)間的比較:干預(yù)前，3組小鼠的力竭游泳時(shí)間無顯著差異(P=0.9

37、92)。干預(yù)第7天時(shí)，與NC組比較，PTX組(P=0.000)、WKKL+PTX組（P=0.001）小鼠的力竭游泳時(shí)間顯著減少;但PTX組與WKKL+PTX組小鼠的力竭游泳時(shí)間無顯著差異。干預(yù)14天時(shí)，與NC組比較， PTX組(P=0.000)、WKKL+PTX組(P=0.002)小鼠的力竭游泳時(shí)間顯著減少。與PTX組比較，NC組(P=0.000)、WKKL+PTX組(P=0.007)組小鼠的力竭游泳時(shí)間顯著延長（P＜0.01）。②不同

38、時(shí)間點(diǎn)的同組小鼠力竭游泳時(shí)間結(jié)果:隨著干預(yù)時(shí)間的增加，NC組小鼠的游泳能力呈現(xiàn)逐步增加的趨勢，PTX組小鼠的游泳能力呈現(xiàn)逐漸下降的趨勢，WKKL+PTX組小鼠的游泳能力呈現(xiàn)波動(dòng)性的增加趨勢。對于NC組小鼠而言，與干預(yù)前比較，干預(yù)第7天(P=0.026)、干預(yù)第14天（P=0.011）的游泳時(shí)間均顯著延長;與干預(yù)第10天比較，干預(yù)第20天時(shí)小鼠的游泳時(shí)間顯著延長(P=0.022)。對于PTX組小鼠而言，與干預(yù)前比較，干預(yù)第7天(P=0.0

39、29)、干預(yù)第14天(P=0.002)的游泳時(shí)間均顯著下降;與干預(yù)第7天比較，干預(yù)第14天時(shí)小鼠的游泳能力無顯著差異(P=0.053)。對于WKKL+PTX組小鼠而言，與干預(yù)前比較，干預(yù)第7天時(shí)(P=0.336)、干預(yù)第14天時(shí)(P=0.284)小鼠的游泳能力先下降后上升，但無顯著差異;與干預(yù)第7天比較，干預(yù)第14天時(shí)小鼠的游泳能力無顯著變化(P=0.134)。
　　 (3)維康顆粒對化療小鼠骨骼肌基因組學(xué)的研究:對PTX組、W

40、KKL+PTX組和正常對照組芯片中每張芯片上44171條基因的比值Ratio，根據(jù)前面所設(shè)條件進(jìn)行分析，得出PTX組vs正常對照組與PTX組vs WKKL+PTX組的交集存在差異表達(dá)基因共47條。其中，PTX組表達(dá)水平上調(diào)(Ratio值大于2)的有39條，表達(dá)水平下調(diào)(Ratio值小于0.5)的有8條。①參與線粒體能量代謝的基因有Atp4a、Pla2g1b、Pikfyve、Lpin2、Pld4、Ppm1h、Acot10等。其中PTX組基

41、因Atp4a表達(dá)下調(diào)，WKKL+PTX組基因Atp4a表達(dá)上調(diào)。PTX組基因Pla2g1b表達(dá)上調(diào)，而WKKL+PTX組基因Pla2g1b表達(dá)下調(diào)。②參與炎癥反應(yīng)、體液免疫反應(yīng)、細(xì)胞粘附、防御應(yīng)答等與免疫功能相關(guān)的基因如S100a9、Igh-6、Ghrl等。PTX組S100a9、Igh-6呈上調(diào)趨勢，Ghrl表達(dá)下調(diào)，WKKL+PTX組S100a9、Igh-6呈下調(diào)趨勢，Ghrl表達(dá)上調(diào)。③兩組的差異表達(dá)基因涉及到多個(gè)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，包括

42、VEGF signaling pathway（血管內(nèi)皮細(xì)胞因子信號通路）、Fc epsilon RIsignaling pathway(Fc epsilon RI信號通路)、MAPK signaling pathway（絲裂原活化蛋白激酶信號通路）、GnRH signaling pathway（促性腺激素釋放激素信號通路）、Phosphatidylinositol signaling system（磷脂酰肌醇信號系統(tǒng)）等。
　　

43、 結(jié)論
　　 1、本實(shí)驗(yàn)中的乳腺癌小鼠模型存在CRF，且CRF的程度隨腫瘤的生長而加重。乳腺癌小鼠CRF的發(fā)生機(jī)制可能與腫瘤本身的增殖所導(dǎo)致的三羧酸循環(huán)、脂肪酸代謝、β-丙氨酸代謝、蘋果酸-天冬氨酸穿梭、線粒體電子傳遞鏈、氨基酸代謝、葡萄糖-丙氨酸循環(huán)、糖異生等多個(gè)代謝通路紊亂有關(guān)。
　　 2、應(yīng)用PTX化療可加重乳腺癌小鼠的CRF，且CRF的程度隨化療的時(shí)間延長而加重。PTX加重乳腺癌小鼠的CRF的發(fā)生機(jī)制可能與PTX

44、引起小鼠丙酮酸代謝、三羧酸循環(huán)、氨基酸代謝、亞精胺和精胺代謝、脂肪酸代謝、半乳糖代謝、肌醇代謝、磷酸肌醇代謝、甘氨酸和絲氨酸代謝、同型半胱氨酸降解、甘油脂質(zhì)代謝、甘油磷酸穿梭等多個(gè)代謝通路紊亂有關(guān)。
　　 3、單獨(dú)應(yīng)用WKKL能顯著改善荷瘤小鼠的一般情況、延長小鼠生存時(shí)間，實(shí)驗(yàn)過程中有緩解乳腺癌小鼠CRF的作用的趨勢，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。WKKL對乳腺癌小鼠CRF的影響可能是通過調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝、甘油磷酸穿梭、磷脂的合成、線粒體電子傳遞

45、鏈等多個(gè)代謝通路有關(guān)。
　　 4、WKKL和PTX聯(lián)合應(yīng)用能顯著改善由腫瘤本身及腫瘤化療所引起的CRF，且效果比單獨(dú)應(yīng)用WKKL好。WKKL和PTX聯(lián)合應(yīng)用緩解乳腺癌小鼠的CRF作用機(jī)制可能是通過調(diào)節(jié)三羧酸循環(huán)、脂肪酸代謝、丙酸代謝、丙酮酸代謝、亞精胺和精胺代謝、氨基酸代謝、葡萄糖-丙氨酸循環(huán)、糖異生、丙酮酸代謝、肌醇代謝、甘油磷酸穿梭、線粒體電子傳遞鏈、蘋果酸-天冬氨酸穿梭、磷脂的合成等多個(gè)代謝通路有關(guān)。
　　 5、W