樹突狀細(xì)胞與細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞共培養(yǎng)聯(lián)合化療對肺腺癌的體外殺傷作用.pdf

1、目的:
　　肺癌是目前世界上最常見的惡性腫瘤之一,其發(fā)病率高居惡性腫瘤之首,是病死率增長最快的惡性腫瘤。肺癌分為非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)和小細(xì)胞肺癌(SCLC)兩大類,其中,NSCLC約占肺癌總發(fā)病率的85％,多數(shù)患者發(fā)現(xiàn)時(shí)已達(dá)晚期,常合并惡性胸腔積液。傳統(tǒng)的治療手段如手術(shù)、放療、化療雖在不斷的發(fā)展,但仍具有一定局限性,肺癌總體生存率仍無明顯提高。隨著對腫瘤發(fā)病機(jī)制的進(jìn)一步研究及生物免疫技術(shù)的不斷發(fā)展,生物治療成為治療惡性腫瘤的

2、重要方法之一,其中作為機(jī)體最強(qiáng)大抗原遞呈細(xì)胞和抗腫瘤免疫反應(yīng)的啟動(dòng)者---樹突狀細(xì)胞（Dendritic cell,DC)備受關(guān)注。DC與細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞(Cytokine-induced killer,CIK)共培養(yǎng)后獲得的DC-CIK具有增值快、殺傷力強(qiáng)的特點(diǎn),是腫瘤生物治療研究的熱點(diǎn)之一。
　　本研究旨從非小細(xì)胞肺癌患者的惡性胸腔積液中獲取成熟樹突狀細(xì)胞,探討惡性胸腔積液來源的樹突狀細(xì)胞與細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞共培養(yǎng)后

3、對細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞的作用及樹突狀細(xì)胞、細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞兩者共培養(yǎng)后聯(lián)合奧沙利鉑對 GLC-82肺腺癌細(xì)胞的體外殺傷作用,為晚期肺癌患者提供治療的新途徑。
　　方法:
　?、偈占?012年9月至2013年10月我院20例經(jīng)手術(shù)、纖維支氣管鏡、淋巴結(jié)活檢、經(jīng)皮肺穿刺活檢、痰檢等方法確診為非小細(xì)胞肺癌且合并胸腔積液患者的胸腔積液,每例收集800-1000ml。雙層密度梯度離心法及細(xì)胞貼壁法獲取惡性胸腔積液中DC前體細(xì)胞

4、,加入粒-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)、白介素-4(IL-4)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)培養(yǎng)9天收獲成熟DC;②分離健康人外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC),加入干擾素-γ(IFN-γ)、CD3單克隆抗體(CD3Ab)、白介素-2(IL-2)體外誘導(dǎo)培養(yǎng)獲取CIK細(xì)胞,將培養(yǎng)9天的部分CIK細(xì)胞與惡性胸腔積液來源的成熟DC以5:1比例混合繼續(xù)培養(yǎng)5天獲得樹突狀細(xì)胞調(diào)節(jié)的細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞(DC-CIK細(xì)胞);③流式細(xì)胞儀分別

5、鑒定DC、CIK細(xì)胞及DC-CIK細(xì)胞的細(xì)胞表型;④MTT法檢測奧沙利鉑、DC-CIK細(xì)胞、CIK細(xì)胞單組或聯(lián)合作用與GLC-82肺腺癌細(xì)胞后對GLC-82肺腺癌細(xì)胞的殺傷作用。
　　結(jié)果:
　　1.肺癌患者的惡性胸腔積液中可獲取 DC前體細(xì)胞,體外經(jīng)GM-CSF、IL-4等細(xì)胞因子誘導(dǎo)培養(yǎng)9天后可獲得成熟DC,經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測培養(yǎng)9天的DC表面標(biāo)志物與培養(yǎng)0天的DC表面標(biāo)志物相比明顯升高,分別為 HLA-DR(70.97±

6、8.96)%vs(41.36±8.57)%、CD80(56.61±7.01)%vs(14.38±5.16)%、CD83(58.85±7.05)%vs(18.49±9.43)%、CD86(60.27±13.94)%vs(20.39±6.67)%(P<0.05)。
　　2.人外周血來源的CIK細(xì)胞與惡性胸腔積液來源的DC聯(lián)合培養(yǎng)獲得 DC-CIK細(xì)胞,流式細(xì)胞儀檢測 DC-CIK細(xì)胞的主要效應(yīng)細(xì)胞CD3+/CD56+細(xì)胞(22.71±

7、3.00)%與同期單獨(dú)培養(yǎng)的CIK細(xì)胞的主要效應(yīng)細(xì)胞CD3+/CD56+細(xì)胞(6.90±1.33)%相比明顯增加(P<0.05),MTT法檢測DC-CIK細(xì)胞對GLC-82肺腺癌體外殺傷作用與CIK細(xì)胞亦明顯增強(qiáng)(P<0.05)。
　　3.DC-CIK細(xì)胞聯(lián)合奧沙利鉑對GLC-82肺腺癌細(xì)胞的殺傷作用明顯高于單獨(dú)DC-CIK細(xì)胞治療組及單獨(dú)奧沙利鉑治療組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　結(jié)論:
　　肺癌患者惡性