IQGAP1在甲狀腺乳頭狀癌增殖侵襲轉(zhuǎn)移中的作用研究.pdf

1、研究背景:
　　甲狀腺乳頭狀癌為甲狀腺惡性腫瘤最常見的一種類型，約占全部甲狀腺癌的80％。分化型甲狀腺癌，包括甲狀腺乳頭狀癌惡性程度低，治愈率高，預(yù)后較好。與腫瘤預(yù)后相關(guān)的臨床病理特征包括:老齡，男性，腫瘤直徑較大，腫瘤腺外侵潤，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，腫瘤分級高。盡管甲狀腺乳頭狀癌患者接受手術(shù)治療及放射性碘131治療后可獲得較好的效果，但仍面臨一定的復(fù)發(fā)率。同時對不適合手術(shù)治療及對碘131耐藥的患者，目前尚無理想治療方案。對甲狀腺

2、乳頭狀癌患者進(jìn)行預(yù)后風(fēng)險評估是術(shù)后管理的重要手段，這將有利于降低復(fù)發(fā)率，提高總生存率。
　　細(xì)胞骨架IQGAP1分子量為189-kDa，包含多個重要的蛋白結(jié)構(gòu)域，參與多個細(xì)胞過程中相關(guān)的分子相互作用參與調(diào)整這些細(xì)胞過程，從而影響細(xì)胞功能。越來越多的證據(jù)表明IQGAP1為原癌基因。如肝癌，乳腺癌，結(jié)腸癌，肺癌，胃癌，黑色素瘤中均檢測到IQGAP1高表達(dá)。目前已有研究證實IQGAP1在甲狀腺乳頭狀癌中高表達(dá)，但其在甲狀腺乳頭狀癌轉(zhuǎn)移灶

3、中的表達(dá)情況及其對甲狀腺乳頭狀癌侵襲轉(zhuǎn)移的作用尚不清楚。利用IQGAP1可能早期診斷PTC惡性程度，用于預(yù)后判斷，同時也可能為PTC設(shè)計靶向藥物治療位點提供依據(jù)。
　　研究IQGAP1在PTC及轉(zhuǎn)移灶，正常甲狀腺組織中的表達(dá)情況。判斷IQGAP1與PTC進(jìn)展的關(guān)系。通過RNA interference(RNAi)技術(shù)沉默PTC細(xì)胞株IQGAP1表達(dá)后，研究其對PTC細(xì)胞生長增殖，侵襲轉(zhuǎn)移的影響。
　　方法:
　　(1)

4、收集湘雅醫(yī)院2013年3月至7月行甲狀腺手術(shù)患者的新鮮組織標(biāo)本。這些組織標(biāo)本分為有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，正常甲狀腺組織。新鮮組織標(biāo)本使用PCR、Western blotting免疫組化檢測IQGAP1 mRNA及蛋白表達(dá)情況。
　　(2)培養(yǎng)PTC細(xì)胞株K1，TPC-1，BCPAP及正常甲狀腺細(xì)胞株Nthy-ori3-1。PCR、Western blotting篩選IQGAP1高表達(dá)細(xì)胞株用于基因沉默實驗。
　　(3

5、)構(gòu)建IQGAP1-siRNA沉默IQGAP1，免疫熒光技術(shù)判斷轉(zhuǎn)染效率。Western blotting檢測沉默效果。
　　(4)沉默IQGAP1表達(dá)后，MTT法用于繪制生長曲線，流式細(xì)胞儀分析腫瘤細(xì)胞增殖，凋亡情況，平板克隆形成實驗分析細(xì)胞增殖。Transwell實驗，劃痕實驗用于判斷腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移能力。
　　結(jié)果:
　　(1) IQGAP1在腫瘤中表達(dá)明顯增高，癌組織IQGAP1明顯高于癌旁組織及正常甲狀腺組織

6、，差別有統(tǒng)計學(xué)意義(p＜0.05)。一二組甲狀腺癌組織間比較，IQGAP1表達(dá)無明顯差異。轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)具有最高IQGAP1表達(dá)量，均高于一二組中癌組織(P＜0.05)，癌旁組織及正常甲狀腺組織中表達(dá)差別無統(tǒng)計學(xué)意義。IQGAP1陽性顆粒主要在細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)。
　　(2) siIQ2在濃度為2μ mol/1時沉默K1和TPC-1細(xì)胞IQGAP1效率最高。IQGAP1蛋白表達(dá)量均減少超過70％，沉默效果佳。
　　(3)沉默IQGAP

7、1抑制腫瘤細(xì)胞生長。沉默K1和TPC-1細(xì)胞IQGAP1蛋白表達(dá)后，連96 h發(fā)現(xiàn)細(xì)胞增殖能力明顯受到抑制，處于靜置期細(xì)胞增多，分裂期細(xì)胞減少，細(xì)胞增殖指數(shù)降低，細(xì)胞凋亡增多。
　　(4) IQGAP1有促進(jìn)乳頭狀癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的能力。IQGAP1沉默后腫瘤細(xì)胞遷移過matrigel的能力減弱，在劃痕內(nèi)遷移的能力減弱。
　　結(jié)論:
　　(1)甲狀腺乳頭狀癌中IQGAP1在mRNA和蛋白表達(dá)水平明顯升高，尤其在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移