Hsp90抑制劑先導(dǎo)物芳香吲唑酮類化合物的合成.pdf

1、Hsp90抑制劑(Hsp Inhibitors)為日前一類新型的抗癌藥物。它以Hsp90這種熱休克蛋白為靶點(diǎn)，通過(guò)抑制Hsp90的伴侶分子作用，從而抑制癌癥的發(fā)生和發(fā)展過(guò)程。由于它是以一類特殊的蛋白為靶點(diǎn)，打破了之前以基因?yàn)榘悬c(diǎn)研究癌癥藥的固定思路，具有新穎性，前瞻性，并且可以與其他類別的抗癌藥聯(lián)合使用。
　　 芳香吲唑酮類化合物為新型的Hsp90抑制劑。世界著名藥物研發(fā)公司Senerex所研發(fā)的SNX-2122，SNX-542

2、2也是一類芳香吲唑酮類結(jié)構(gòu)，并且這兩種藥物已經(jīng)進(jìn)入臨床測(cè)試。國(guó)內(nèi)外的文獻(xiàn)研究表明，芳香吲唑酮類化合物的結(jié)構(gòu)具有多種生理活性，在癌癥方面的活性具有廣泛的應(yīng)用前景。在此基礎(chǔ)上，為了尋找一種高效低毒的Hsp90抑制劑，本研究以國(guó)外的文獻(xiàn)為基礎(chǔ)，合成了11種芳香吲唑酮類化合物作為先導(dǎo)物，并在此基礎(chǔ)上得到所設(shè)計(jì)的3個(gè)目標(biāo)產(chǎn)物，通過(guò)1HNMR和MS進(jìn)行結(jié)構(gòu)確證，并且有選擇地做了活性檢測(cè)和工藝放大研究。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，我們以芳香吲唑酮作為母核結(jié)構(gòu)所設(shè)計(jì)的分

3、子具有一定的活性，其中，化合物AX1319（最終合成的芳香吲唑酮類化合物）對(duì)Hsp90α表現(xiàn)出較好的抑制活性。工藝優(yōu)化的實(shí)驗(yàn)表明，在無(wú)水乙醇溶液中，與2e.q.(e.q.=equivalent)乙醇鈉在120攝氏度反應(yīng)16h時(shí)目標(biāo)產(chǎn)物的產(chǎn)率最高。
　　 本文內(nèi)容主要分為以下幾個(gè)部分：
　　 一、芳香吲唑酮類化合物的合成
　　 1、選擇兩條路線合成芳香吲唑酮類化合物：
　　 1.1、采取以不同衍生化的5,5

4、-二甲基-1,3-環(huán)己二酮與4-取代苯基肼在酸性條件下發(fā)生環(huán)合反應(yīng)得到三種芳香吲唑酮類化合物。
　　 方法：4-取代芳香胺在酸性條件下與亞硝酸鈉在冰浴中得到4-取代芳基重氮鹽，重氮鹽反應(yīng)液在NaHSO3和NaOH堿性溶液的作用下還原，生成4-取代苯肼鹽酸鹽。得到的芳基肼鹽酸鹽與不同衍生化的5,5-二甲基-1,3-環(huán)己二酮在酸性條件下發(fā)生環(huán)合反應(yīng)，得到最終化合物4-（3，6，6-三甲基-4-氧-4,5,6，7-四氫吲唑-1-基）苯

5、甲酸,4-（3-乙氧羰基-6，6-二甲基-4-氧-4,5,6，7-四氫吲唑-1-基）苯甲酸,4-（6，6-二甲基-4-氧-3-(三氟甲基)-4,5,6，7-四氫吲唑-1-基）苯甲酸。結(jié)構(gòu)經(jīng)1HNMR，MS確證。
　　 1.2、采取5,5-二甲基-1,3-環(huán)己二酮與亞聯(lián)氨基（肼叉）氯在堿性條件下合成芳香吲唑酮類化合物。
　　 方法：4-取代芳香胺在酸性條件下與亞硝酸鈉在冰浴中得到4-取代芳香重氮鹽，調(diào)節(jié)pH至5后滴加2-氯

6、乙酰乙酸乙酯的乙醇溶液，得到4-取代肼叉氯化合物。乙醇重結(jié)晶后在堿性條件下與5,5-二甲基-1,3-環(huán)己二酮發(fā)生親核取代、脫水反應(yīng)后，經(jīng)過(guò)柱層析得到9個(gè)最終產(chǎn)物：4-（3-乙氧羰基-6，6-二甲基-4-氧-4,5,6，7-四氫吲唑-1-基）苯甲酸，1-（4-溴苯基）-6，6-二甲基-4-氧-4,5,6,7-四氫-1H-吲唑-3-羧酸乙酯．1-（4-磺胺基）-6,6-二甲基-4-氧-4,5,6，7-四氫-1H-吲唑-3-羧酸乙酯，1-（4

7、-氟苯基）-6，6-二甲基-4-氧-4,5,6，7-四氫-1H-吲唑-3-羧酸乙酯，6，6-二甲基-4-氧-1-（4-（三氟甲基）苯基）-4,5,6，7-四氫-1H-吲唑-3-羧酸乙酯，6，6-二甲基-1-（4-硝基苯基）-4-氧-4,5,6，7-四氫-1H-吲唑-3-羧酸乙酯，6，6-二甲基-4，氧-1-對(duì)位甲苯基-4,5,6，7-四氫-1H-吲唑-3-羧酸乙酯，6，6-二甲基-4-氧-苯基-4,5,6，7-四氫-1H-吲唑-3-羧酸

8、乙酯，1-（4-氰基苯基）6，6-二甲基-4-氧-4,5,6，7-四氫-1H-吲唑-羧酸乙酯，結(jié)構(gòu)均經(jīng)1HNMR和MS確證。
　　 2、合成所設(shè)計(jì)的Hsp90抑制劑
　　 將得到的三種芳香吲唑酮類化合物在DMF(N，N-二甲基甲酰胺)中用HBTU（苯并三氮唑-N,N，N1，N1，四甲基脲六氟磷酸鹽）與4-氨基環(huán)己醇發(fā)生酰胺化反應(yīng)，得到三個(gè)所設(shè)計(jì)的Hsp90抑制劑，結(jié)構(gòu)經(jīng)1HNMR和MS確證。
　　 二、Hsp90

9、抑制劑的活性篩選
　　 近年來(lái)發(fā)現(xiàn)Hsp90抑制劑的作用機(jī)制是通過(guò)與Hsp90α蛋白中N端的ATP活性中心相結(jié)合，并以此為基礎(chǔ)使用熒光偏振法來(lái)檢測(cè)Hsp90α結(jié)合模型，即用熒光偏振的方法測(cè)定所合成的化合物AX1319對(duì)于Hsp90α的親和力。利用熒光偏振原理，在均相溶液中，以標(biāo)記的AX1319作為配基，與Hsp90α蛋白作用，采用熒光偏振儀檢測(cè)熒光偏振值。以競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合方式評(píng)價(jià)AX1319對(duì)于Hsp90α的親和力。結(jié)果顯示AX13

10、19具備一定的Hsp90親和力，這種結(jié)構(gòu)作為Hsp90抑制劑是可行的。
　　 三、AX1319的工藝優(yōu)化研究
　　 對(duì)AX1319合成路線中關(guān)鍵步驟進(jìn)行工藝優(yōu)化研究，考察反應(yīng)試劑，溫度，時(shí)間，堿量對(duì)于目標(biāo)產(chǎn)物產(chǎn)率的影響。方法：采用Agilent1100高效液相色譜為檢測(cè)手段，采用外標(biāo)法以目標(biāo)化合物的保留時(shí)間作為對(duì)照峰，檢測(cè)在不同反應(yīng)條件下所得到的反應(yīng)液中產(chǎn)物峰的相對(duì)含量，實(shí)驗(yàn)表明：采用乙醇鈉/乙醇反應(yīng)條件，于120攝氏度