肺腺癌骨轉(zhuǎn)移動(dòng)物模型的建立及針孔SPECT顯像在模型建立中的應(yīng)用.pdf

1、目的:1.建立穩(wěn)定的人肺腺癌裸鼠移植瘤骨轉(zhuǎn)移模型。2.分析模型建立過(guò)程的關(guān)鍵影響因素。3.探索在體外條件下分離、傳代、擴(kuò)增人肺腺癌細(xì)胞株SPC-A-1的方法原理。 4.研究放射性核素99mTc-MDP和X線攝片放射性劑量對(duì)骨轉(zhuǎn)移細(xì)胞培養(yǎng)及染色體變化的影響。5.對(duì)比分析針孔SPECT在建立骨轉(zhuǎn)移動(dòng)物模型過(guò)程中的應(yīng)用前景。6.初步分析SPC-A-1BM細(xì)胞的染色體及VEGF mRNA表達(dá)。 方法:1.選取肺腺癌細(xì)胞株SPC-A-1，

2、在體外傳代擴(kuò)增至一定數(shù)目，然后選擇兩組裸鼠，將肺腺癌細(xì)胞株分別接種于左心室和肺原位，在相同條件下觀察兩組裸鼠體內(nèi)移植瘤的生長(zhǎng)情況。2.對(duì)SPC-A-1細(xì)胞進(jìn)行“接種-擴(kuò)增-接種”循環(huán)周期共10次。3.分別用針孔SPECT（GE，Millennium VG，USA，d=1mm）與X線攝片（40Kv、2mA、6s)對(duì)裸鼠骨轉(zhuǎn)移情況進(jìn)行檢測(cè)：將SPC-A-1細(xì)胞分成七組，即X線組和按接受99mTc-MDP放射性劑量大小的不同分成的六個(gè)實(shí)驗(yàn)組（

3、分別為空白對(duì)照組、37MBq、74MBq、111MBq、370MBq、740MBq組)，每組再按不同的照射時(shí)間分為4、8、12、24、48、72、96h各一瓶，每天同一時(shí)間記錄細(xì)胞量的改變。4.在無(wú)菌條件下采集骨轉(zhuǎn)移細(xì)胞，離心后接種培養(yǎng)傳代擴(kuò)增，接種-擴(kuò)增-接種循環(huán)10次。5.在上述10次循環(huán)周期中的后四個(gè)周期中，從接種細(xì)胞第三周開(kāi)始，每?jī)芍芴幩酪唤M裸鼠，摘取肺、肝、腎等器官并進(jìn)行固定、石蠟包埋、連續(xù)切片及H&E染色，顯微鏡下觀察各臟器

4、腫瘤轉(zhuǎn)移情況。6.將上述經(jīng)10次循環(huán)周期后得到的細(xì)胞進(jìn)行染色體G帶分析，對(duì)親代細(xì)胞SPC-A-1及培養(yǎng)所得的SPC-A-1BM細(xì)胞染色體數(shù)量及形態(tài)變化進(jìn)行比較。應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR) 方法，檢測(cè)SPC-A-1BM細(xì)胞中VEGF mRNA的表達(dá)。 結(jié)果：1.SPC-A-1細(xì)胞經(jīng)過(guò)重復(fù)“接種-擴(kuò)增-接種”循環(huán)10次后,獲得了高親骨特性的肺腺癌細(xì)胞SPC-A-1BM。2.對(duì)裸鼠左心室接種后的骨轉(zhuǎn)移檢出率達(dá)100％,

5、對(duì)裸鼠肺原位接種后的骨轉(zhuǎn)移檢出率約達(dá)60％。3.與111MBq組相比，37 MBq組和X線組的細(xì)胞數(shù)量差異并無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=7.93，P=0.693；F=5.60，P=0.780)，而且，111MBq組的顯像時(shí)間提前，效果清晰。此外，111MBq劑量組對(duì)小鼠疑似骨轉(zhuǎn)移灶的細(xì)胞培養(yǎng)成功率達(dá)81.5％，遠(yuǎn)高于X線組的13.3％。4.裸鼠接種SPC-A-1BM細(xì)胞后，在整個(gè)實(shí)驗(yàn)觀察過(guò)程中，肉眼及鏡下均未見(jiàn)肝臟、腎臟部位的轉(zhuǎn)移灶。但后四個(gè)傳代

6、-接種周期中，在左心室接種組，腎上腺、頜下腺和淋巴結(jié)均見(jiàn)轉(zhuǎn)移,轉(zhuǎn)移率分別為100％，100％，56.3％；而于肺原位接種組，腎上腺、頜下腺均未見(jiàn)轉(zhuǎn)移，只是對(duì)側(cè)肺及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移部位的轉(zhuǎn)移率分別達(dá)到了100％，40.6％。同時(shí)數(shù)據(jù)還顯示，兩接種組的各組織轉(zhuǎn)移率差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.016）5.對(duì)親代細(xì)胞及SPC-A-1BM細(xì)胞進(jìn)行染色體的分析結(jié)果表明，SPC-A-1BM細(xì)胞的多倍體數(shù)顯著增多，顯示出其不穩(wěn)定性比親代增加。此外，分析結(jié)果還

7、表明 SPC-A-1BM細(xì)胞的染色體數(shù)目及形態(tài)改變較親代細(xì)胞多。6. 與SPC-A-1細(xì)胞相比，SPC-A-1BM細(xì)胞的VEGF-B、VEGF-C及VEGF-D mRNA表達(dá)上調(diào)，而VEGF-A mRNA表達(dá)下調(diào)。 結(jié)論：1.本課題成功建立了肺腺癌裸鼠移植瘤骨轉(zhuǎn)移模型。2.深入分析了影響該骨轉(zhuǎn)移模型能否建立的關(guān)鍵因素。3.初步證明了針孔核素顯像在肺腺癌骨轉(zhuǎn)移動(dòng)物模型建立中的應(yīng)用價(jià)值。4.證明了SPC-A-1BM細(xì)胞的促血管生成能