HPV陽性宮頸腺癌相關(guān)miRNAs篩選和功能分析.pdf

1、中山大學博士后學位論文HPV陽性宮頸腺癌相關(guān)miRNAs篩選和功能分析姓名：吳維光申請學位級別：博士后專業(yè)：婦產(chǎn)科學指導教師：林仲秋20081101H P V 陽性宮頸腺癌相關(guān)m i R N A s 篩選和功能分析 中山大學博士后出站報告機制開拓了新方向。M i c r o R N A ( m i R N A ) 是1 9 ～2 4 個核苷酸( n u c l e o t i d e ，n t ) 長度的單鏈R N A分子，是內(nèi)源性、不

2、編碼蛋白的短小R N A ，在基因表達調(diào)控方面發(fā)揮重要作用。m i R N A 基因首先由R N AP o l y m e r a s eI I 轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生幾百甚至幾千n t 的初級產(chǎn)物，在核內(nèi)被R n a s eI I I 內(nèi)切酶家族中的D r o s h a 酶切割成7 0 個n t 左右的發(fā)夾狀前體( p r e - m i R N A ) ，p r e —m i R N A 在R a n _ G T P 和轉(zhuǎn)運蛋白E x p o

3、r t i n 一5 的協(xié)同作用下轉(zhuǎn)運出核。在細胞漿中，p r e - m i R N A 經(jīng)D i c e r 酶切割成約1 9 ～2 4 個n t 的雙鏈m i R N A 。其中一條R N A 鏈進入核蛋白復合體，形成R N A 誘導的沉默復合體( R N A —i n d u c e ds il e n c i n gc o m p l e x ，R I S C ) ，這條單鏈R N A 稱為成熟m i R N A ，而別一條R

4、 N A 單鏈則被降解。R I S C 引導m i R N A 與互補的m R N A 形成完全或不完全的配對，降解m R N A或阻遏其轉(zhuǎn)錄后翻譯，產(chǎn)生基因沉默。人類基因組中約有1 0 0 0 多個m i R N A 基因，每個m i R N A 可調(diào)節(jié)2 0 0 多個靶基因，因此約三分之一編碼蛋白基因受m i R N A 調(diào)控。m i R N A s 參與了動植物多種生命過程，包括增殖、凋亡、發(fā)育、分化和代謝等。m i R N A

5、s 表達異常與病毒感染關(guān)系密切，參與了病毒的致病過程，同時有證據(jù)顯示m i R N h s 參與了惡性腫瘤的發(fā)生。對基因組中腫瘤相關(guān)基因區(qū)域序列分析時發(fā)現(xiàn)，有5 2 ．5 ％的m i R N A 基因位于其附近。多種腫瘤組織中發(fā)現(xiàn)m i R N A s 表達異常，形成了不同腫瘤的m i R N A 表達譜。有學者認為在腫瘤組織中低表達的m i R N A本身可能就是癌基因，而在腫瘤組織中高表達的m i R N A 本身可能就是抑癌基因，

6、m i R N A 在腫瘤發(fā)生和發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用。目前，關(guān)于m i R N A s 在高危型H P V誘導宮頸上皮細胞惡性轉(zhuǎn)化過程中的作用還不明確，有必要進一步探討。研究目的：( 1 ) 篩選H P V 陽性宮頸腺癌組織特異的m i R N A 表達譜；( 2 ) 調(diào)控H P V陽性宮頸腺癌組織特異表達m i R N A ，探討其對宮頸腺癌細胞生物學行為的作用；( 3 ) 調(diào)控H P V 陽性宮頸腺癌組織特異表達m i R N A

7、 ，探討其對宮頸腺癌細胞基因表達的影響。研究方法：( 1 ) 應用m i R N A 芯片檢測l l 例H P V 陽性宮頸腺癌組織和癌旁組織m i R N A s 表達，篩選H P V 陽性宮頸腺癌組織特異表達的m i R N A s ，并應用定量P C R方法進行驗證；( 2 ) 應用A m b i o n 公司調(diào)控m i R N A 表達的系列試劑，上調(diào)H e L a 細胞m i R - 9 9 b 表達；( 3 ) 應用M T