西洋參莖葉總皂苷對(duì)絕經(jīng)后女性冠心病患者的血管保護(hù)效應(yīng)及機(jī)制研究.pdf

1、流行病學(xué)研究表明，心血管系統(tǒng)疾病的發(fā)病率存在性別差異，絕經(jīng)前女性心血管病的發(fā)病率低于男性，但絕經(jīng)后男女無差異。提示，雌二醇對(duì)血管有保護(hù)作用，因此雌激素替代療法一時(shí)間成為業(yè)界的研究熱點(diǎn)。但是，幾項(xiàng)臨床研究表明，雌二醇在保護(hù)血管內(nèi)皮完整性的同時(shí)能夠使絕經(jīng)期女性心血管發(fā)病率增加，并能導(dǎo)致乳腺癌、子宮內(nèi)膜癌、深靜脈栓塞等嚴(yán)重的副作用。醫(yī)學(xué)家們?cè)O(shè)想:有沒有一種物質(zhì)既具有雌激素樣效應(yīng)而缺無雌激素不良反應(yīng)或不良反應(yīng)較少？研究者將目光投向了類雌激素樣藥

2、物的尋求和研究方面。
　　 既往課題組研究證實(shí)，西洋參莖葉總皂苷具有一定保護(hù)血管效應(yīng)，機(jī)制研究發(fā)現(xiàn)該藥可以防止血管內(nèi)皮過氧化損傷，抗動(dòng)脈粥樣硬化等。結(jié)合其大補(bǔ)元?dú)獾墓π?，基于中醫(yī)元?dú)獾拿枋雠c雌激素作用具有某些相似性，推測(cè)西洋參可能具有類雌激素樣作用。本研究首先觀察了西洋參莖葉的有效組分（心悅膠囊）對(duì)絕經(jīng)后女性冠心病(coronary heart disease，CHD)患者血清E2水平、血脂代謝、氧化應(yīng)激、炎癥和血管內(nèi)皮功能的影

3、響，并借助去勢(shì)ApoE-/-小鼠模型觀察了西洋參莖葉總皂苷對(duì)雌激素水平、雌激素效應(yīng)及雌激素介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路PI3K/AKt關(guān)鍵蛋白表達(dá)的變化，探討PQS是否具有類雌激素樣血管保護(hù)作用，為PQS防治絕經(jīng)后冠心病的臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)和臨床依據(jù)。
　　 本課題研究分為三部分:文獻(xiàn)綜述、臨床研究和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究。
　　 1、文獻(xiàn)綜述:本部分分別從植物雌激素的心血管保護(hù)作用研究進(jìn)展、雌激素受體介導(dǎo)的信號(hào)通路與心血管系統(tǒng)兩個(gè)方面進(jìn)行綜

4、述。
　　 2、臨床研究:心悅膠囊對(duì)絕經(jīng)后女性冠心病患者的血管保護(hù)效應(yīng)研究。
　　 目的:觀察心悅膠囊對(duì)絕經(jīng)后女性冠心病患者血管保護(hù)作用。
　　 方法:冠心病診斷參照1999年及2002年美國(guó)心臟病學(xué)會(huì)(ACC)/美國(guó)心臟協(xié)會(huì)(AHA)/美國(guó)醫(yī)師學(xué)會(huì)及美國(guó)內(nèi)科學(xué)會(huì)(ACP-ASIM)聯(lián)合協(xié)定關(guān)于《慢性穩(wěn)定性心絞痛診療指南》、《不穩(wěn)定性心絞痛、無ST段抬高心肌梗死診療指南》。同時(shí)，絕經(jīng)后期定義參照1999年國(guó)際絕經(jīng)

5、學(xué)會(huì)定義。選擇80例絕經(jīng)后女性CHD患者，隨機(jī)分為兩組:治療組40例，在常規(guī)西藥治療基礎(chǔ)上給予心悅膠囊治療;對(duì)照組40例，采用常規(guī)西藥治療。以絕經(jīng)后健康女性作為健康對(duì)照組30例。對(duì)照組和治療組均于行冠狀動(dòng)脈造影前和用藥12w后，清晨空腹抽取靜脈血，分離血清。健康對(duì)照組于清晨空腹?fàn)顟B(tài)下抽取靜脈血，分離血清。電化學(xué)發(fā)光法測(cè)定血清雌二醇含量，ELISA法測(cè)定血清NF-κB、sICAM-1、sE-selectin、NO、ET-1含量，生化法測(cè)定

6、血清SOD活力、MDA含量。
　　 結(jié)果:與健康組相比，冠心病組血清雌二醇、SOD活力、NO含量和HDL-C明顯下降，血清TC、TG、LDL-C、MDA、NF-κB、sICAM-1、sE-selectin和ET-1升高（P＜0.01或P＜0.05）。其中治療組較對(duì)照組雌二醇水平、SOD活性及NO含量和HDL-C有上升趨勢(shì)，而TC、TG、LDL-C、MDA、NF-κB、sICAM-1、sE-selectin和ET-1水平有下降趨勢(shì)

7、(P＞0.05)。
　　 結(jié)論:絕經(jīng)后女性冠心病患者雌二醇水平明顯下降，心悅膠囊有提高雌二醇水平趨勢(shì)，且對(duì)血管具有保護(hù)作用，其機(jī)制除了能夠改善絕經(jīng)后冠心病患者血脂代謝紊亂，主要還表現(xiàn)在對(duì)抗過氧化、抑制炎癥反應(yīng)以及調(diào)節(jié)血管舒縮狀態(tài)三個(gè)方面。
　　 3、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究:西洋參莖葉總皂苷對(duì)去勢(shì)ApoE-/-動(dòng)脈粥樣硬化雌性小鼠的血管保護(hù)作用及機(jī)制研究
　　 目的:觀察西洋參莖葉總皂苷對(duì)去勢(shì)ApoE-/-動(dòng)脈粥樣硬化雌性小

8、鼠的血管保護(hù)效應(yīng)及相應(yīng)機(jī)制。
　　 方法:采用高脂飼料喂養(yǎng)12w聯(lián)合摘除卵巢建立去勢(shì)ApoE-/-主動(dòng)脈粥樣硬化雌性小鼠模型，將造膜成功的去勢(shì)ApoE-/-動(dòng)脈粥樣硬化小鼠分為模型組、雌二醇組（E2組）、西洋參莖葉總皂苷組（PQS組）、雌二醇+雌二醇受體拮抗劑劑（氟維司群）組（EA組）、西洋參莖葉總皂苷+雌二醇受體拮抗劑劑（氟維司群）組(PQSA組)。將C57BL/6J（假手術(shù)組）雌性小鼠作為對(duì)照組，普通飼料喂養(yǎng)12w。除對(duì)照組

9、和模型組灌服等體積的蒸餾水外，其余各組灌服和（或肌肉注射）相應(yīng)藥物。干預(yù)12周后，所有小鼠禁食12小時(shí)，麻醉，眼球取血，分離血清。取從腎動(dòng)脈開口處到升主動(dòng)脈段的主動(dòng)脈，上端2cm用于常規(guī)HE染色，其余部分迅速凍于液氮中，2h后置于-80℃冰箱保存，用于western-blot和PCR檢測(cè)。進(jìn)行小鼠主動(dòng)脈組織病理學(xué)觀察，ELISA法測(cè)定血清17β雌二醇、NO、ET-1、NF-κB、E-selectin、ICAM-1含量，生化法測(cè)定小鼠血清

10、SOD、MDA含量。RT-PCR法測(cè)定主動(dòng)脈iNOS和eNOS基因表達(dá)水平，Western-blot法檢測(cè)小鼠主動(dòng)脈p-Akt蛋白水平。
　　 結(jié)果:
　　 ①組織病理學(xué)觀察顯示:模型組小鼠主動(dòng)脈粥樣硬化斑塊含有大量泡沫細(xì)胞，PQS具有改善動(dòng)脈粥樣硬化的作用，該作用與E2相似。
　　 ②生化指標(biāo)檢測(cè)顯示:與對(duì)照組相比，模型組小鼠血清17β雌二醇和SOD活力明顯下降，MDA、NF-κB、E-selectin、ICA

11、M-1、NO、ET-1含量均升高(P＜0.01或P＜0.05);與模型組相比，E2組和PQS組小鼠血清17β雌二醇和SOD水平明顯升高，MDA、NF-κβ、E-selectin、ICAM-1、NO、ET-1含量均明顯減少(P＜0.01或P＜0.05);而EA組小鼠血清17β雌二醇雖明顯升高(P＜0.01)，但SOD活力、MDA、NF-κB、E-Selectin、ICAM-1、NO、ET-1與模型組相比無顯著性差異(P＞0.05);PQS

12、A組與EA組結(jié)果類似。
　　 ③主動(dòng)脈iNOS和eNOS基因表達(dá)檢測(cè)顯示:與對(duì)照組相比，模型組主動(dòng)脈iNOSmRNA表達(dá)顯著升高(P＜0.01)，eNOSmRNA表達(dá)顯著降低(P＜0.01);與模型組相比，E2組和PQS組iNOSmRNA表達(dá)顯著降低（P＜0.01或P＜0.05），eNOSmRNA表達(dá)顯著升高（P＜0.01或P＜0.05），而EA組和PQSA組主動(dòng)脈iNOSmRNA、eNOSmRNA表達(dá)差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0

13、.05)。
　　 ④p-Akt蛋白檢測(cè)顯示:與對(duì)照組相比，模型組小鼠主動(dòng)脈p-Akt蛋白表達(dá)均明顯減少(P＜0.01);與模型組相比，E2和PQS組p-Akt蛋白表達(dá)均明顯升高（P＜0.01或P＜0.05），而EA組與PQSA組p-Akt蛋白表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 去勢(shì)ApoE-/-動(dòng)脈粥樣硬化雌性小鼠雌激素水平下降明顯，且脂質(zhì)代謝紊亂，炎癥因子高表達(dá)，而西洋參莖葉總皂苷具有提