成都地區(qū)犬布氏桿菌病血清學(xué)調(diào)查及Real-time PCR檢測方法的研究.pdf

1、犬布氏桿菌?。ê喎Q犬布?。┦侨腥静际蠗U菌后引起的一種傳染性疾病，在犬舍中極易流行傳播。我國近年來連續(xù)分離到犬種布氏桿菌，提示犬布病流行趨勢逐漸上升。隨著國內(nèi)飼養(yǎng)寵物犬的家庭日益增多，犬布病的預(yù)防與控制也應(yīng)得到更加密切的關(guān)注。本研究采用虎紅平板凝集試驗（Rose Bengal Plate Test，RBPT）和試管凝集試驗(Standard tube Agglutination Test, SAT)調(diào)查了成都市及周邊地區(qū)犬布病的流行情況

2、，并初步建立了實時熒光定量PCR.(Real-time PCR)快速檢測方法。
　　1.犬布氏桿菌病流行病學(xué)調(diào)查:本研究采集了成都市博愛動物醫(yī)院門診犬、金堂犬場和流浪犬的血清，共計1010份，分別使用光滑型和粗糙型RBPT對所有臨床樣本進行初步檢測，陽性結(jié)果的血清再進一步使用光滑型和粗糙型SAT進行復(fù)檢。結(jié)果顯示，RBPT共檢測出33份陽性血清，其中光滑型和粗糙型分別為14份和19份，光滑型和粗糙型RBPT陽性率分別為1.39％和

3、1.88％，總RBPT陽性率為3.27％; SAT共檢測出13份陽性血清，其中光滑型和粗糙型分別為1份和12份，光滑型和粗糙型SAT陽性率分別為0.10％和1.19％，總SAT陽性率為1.29％。本研究結(jié)果表明，流浪犬的布氏桿菌病陽性率最高，其次是犬場，而動物醫(yī)院門診犬的陽性率最低。
　　2.布氏桿菌病Real-time PCR檢測方法的建立:根據(jù)GenBank上提供的布氏桿菌屬高度保守基因bcsp31設(shè)計一對特異性引物，以犬種布

4、氏桿菌標(biāo)準(zhǔn)株RM6/66 bcsp31基因構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒pGM-T-bcsp31，并以此建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。引物特異性結(jié)果表明，8種布氏桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌株基因組DNA均擴增出198bp大小的片段，而對照菌株均呈陰性，說明建立的方法特異性好。從犬布氏桿菌病Real-time PCR檢測方法的敏感性分析結(jié)果看出，普通PCR最低限度只能擴增10-2數(shù)量級濃度的DNA，而本次建立的Real-timePCR方法最低限度能夠擴增10-4數(shù)量級濃度的DNA樣本，靈