MicroRNA-130a-16-381在豬卵巢顆粒細(xì)胞中的表達(dá)和功能研究.pdf

1、卵巢的生理調(diào)控過程涉及到多種細(xì)胞因子和信號通路，卵巢顆粒細(xì)胞的增殖、分化和凋亡與卵泡的發(fā)育、成熟乃至閉鎖是緊密相關(guān)的。microRNAs是非編碼小RNAs，參與多種生理功能調(diào)控，但在豬卵泡發(fā)育過程中的功能研究較少，依據(jù)本課題組前期小鼠卵巢microRNAs的深度測序結(jié)果及小鼠卵泡和顆粒細(xì)胞中的初步研究結(jié)果，本課題有針對性地選定對小鼠卵泡發(fā)育以及顆粒細(xì)胞生長、功能有顯著影響的三種micro RNAs(miR-130a/16/381)，以進(jìn)

2、一步研究它們在豬卵巢顆粒細(xì)胞中的表達(dá)以及對顆粒細(xì)胞增殖、凋亡和分泌激素的影響。研究結(jié)果如下:
　　(1) RT-PCR檢測了miR-130a、miR-16及miR-381在豬顆粒細(xì)胞中的內(nèi)源表達(dá)情況，結(jié)果顯示這三種miRNAs在豬顆粒細(xì)胞中均有表達(dá)。
　　(2)microRNAs過表達(dá)對豬卵巢顆粒細(xì)胞的細(xì)胞周期、增殖和細(xì)胞凋亡的影響。結(jié)果顯示這三種miRNAs分別過表達(dá)后對細(xì)胞凋亡沒有顯著性影響。過表達(dá)miR-130a可以顯

3、著性地促進(jìn)細(xì)胞的增殖（P＜0.001），處于G1期的細(xì)胞數(shù)量顯著性地減少（P＜0.05），處于S期的細(xì)胞數(shù)量顯著性地增多(P＜0.01);過表達(dá)miR-16可以顯著性地抑制細(xì)胞的增殖(P＜0.001)，PCNA的mRNA水平顯著降低(P＜0.05)，處于G2期的細(xì)胞數(shù)量顯著性下降(P＜0.01);過表達(dá)miR-381顯著性地抑制細(xì)胞增殖(P＜0.01)，PCNA的mRNA水平顯著性地降低（P＜0.01），但不影響細(xì)胞的周期分布。

4、　　(3) microRNAs過表達(dá)對豬卵巢顆粒細(xì)胞的雌激素和孕激素分泌的影響。結(jié)果顯示，這三種microRNAs分別過表達(dá)后均能顯著性促進(jìn)顆粒細(xì)胞分泌雌激素以及孕激素(P＜0.01)。Real time-PCR檢測類固醇激素合成相關(guān)基因的mRNA水平，結(jié)果顯示，過表達(dá)miR-130a顯著性下調(diào)StAR(P＜0.001)和CYP11A1(P＜0.05)的表達(dá)，顯著性上調(diào)CYP19A1(P＜0.05)的表達(dá)，但對HSD3β mRNA水平?jīng)]

5、有顯著性的影響;過表達(dá)miR-16顯著性下調(diào)StAR(P＜0.001)和CYP11A1(P＜0.05)，對CYP19A1以及HSD3β的mRNA水平卻沒有顯著性的影響;過表達(dá)miR-381顯著性下調(diào)StAR(P＜0.001)、顯著性上調(diào)HSD3β(P＜0.05)的表達(dá)，CYP11A1以及CYP19A1的mRNA水平?jīng)]有顯著性影響。
　　結(jié)果表明，miR-130a/16/381對豬卵巢顆粒細(xì)胞生長以及分泌激素的功能有影響，結(jié)果為進(jìn)一