頸部迷走神經(jīng)切斷對病毒性心肌炎小鼠炎癥因子的影響.pdf

1、目的:膽堿能抗炎通路（Cholinergic Antiinflammatory Pathway，CAP）通過激活表達于炎性細胞表面的α7煙堿型乙酰膽堿受體(α7 nicotinic acetylcholinereceptor，α7 nAChR)，減少促炎因子的生成及釋放，從而減輕機體的炎癥反應(yīng)。目前研究已發(fā)現(xiàn)，在缺血再灌注損傷、敗血癥、內(nèi)毒素休克、炎癥性腸病、自身免疫性心肌炎、胰腺炎等多種疾病動物模型中，通過電刺激迷走神經(jīng)或藥物激動α7

2、 nAChR興奮膽堿能抗炎通路，可以減輕這些疾病的炎癥反應(yīng)和病理損害，起到明顯的治療效果。然而膽堿能抗炎通路在病毒性心肌炎中的作用及具體機制目前尚不明確。本實驗通過觀察切斷迷走神經(jīng)及煙堿（α7 nAChR激動劑）處理對于病毒性心肌炎小鼠的影響，來進一步探討膽堿能抗炎通路在病毒性心肌炎中的作用。
　　方法:200只4周齡BALB/C小鼠隨機分5組:正常對照組(n=40)，假手術(shù)組(n=40)，煙堿組(n=40)，右側(cè)頸部迷走神經(jīng)切斷

3、組（n=40，簡稱切斷組），右側(cè)頸部迷走神經(jīng)切斷+煙堿組（n=40，簡稱切斷+煙堿組）。假手術(shù)組麻醉后不切斷右側(cè)頸部迷走神經(jīng)，而僅分離迷走神經(jīng)。后4組經(jīng)腹腔接種柯薩奇病毒B3(Coxsackievirus B3，CVB3)建立急性病毒性心肌炎模型，正常組腹腔注射等量不含病毒的病毒培養(yǎng)液，接種當天記為第0天，24小時后煙堿組、切斷+煙堿組每日腹腔注射1.2 mg/kg煙堿，余下3組每日腹腔注射等量磷酸鹽緩沖液，直至第14天末。分別在病毒感

4、染小鼠后第7天和14天，采用超聲心動圖儀評價各組小鼠心功能（左心室舒張末期與收縮末期直徑、左心室射血分數(shù)及短軸縮短分數(shù)）的變化。分別于病毒接種第7和14天每組各隨機抽取10只小鼠處死，無菌取心臟行病理切片，HE染色觀察心肌組織炎癥損傷程度。熒光定量PCR法測定CVB3 mRNA的表達。熒光定量PCR及ELISA法分別檢測心肌組織TNF-α、IL-1β、IL-6及IFN-γ的mRNA水平和蛋白表達水平。
　　結(jié)果:1.心臟超聲參數(shù):

5、在第7天，假手術(shù)組、煙堿組、切斷組及切斷+煙堿組小鼠在LVEDd、LVESd、LVEF、LVFS上無統(tǒng)計學(xué)差異。在第14天，煙堿組的LVFS、LVEF明顯高于假手術(shù)組(P＜0.01)，切斷組的LVFS、LVEF明顯低于假手術(shù)組(P＜0.05)，而比較LVEDd、LVESd無統(tǒng)計學(xué)差異。2.病理組織學(xué):與假手術(shù)組比較，切斷組的心肌病變程度明顯加重(P＜0.05)，煙堿組的心肌病變程度明顯減輕(P＜0.05)，切斷+煙堿組的心肌病變程度介于

6、切斷組與煙堿組之間，與假手術(shù)組比較無統(tǒng)計學(xué)差異。3.病毒基因表達:在第7、14天，假手術(shù)組、煙堿組、切斷組及切斷+煙堿組四組心肌炎模型小鼠的CVB3 mRNA表達水平無統(tǒng)計學(xué)差異。4.炎癥因子的基因和蛋白表達水平:第7天，與假手術(shù)組比較，切斷組心肌組織內(nèi)炎癥因子TNF-α、 IL-1β、IL-6在mRNA水平和蛋白水平表達明顯增加(P＜0.05)，煙堿組心肌組織炎癥因子TNF-α、IL-1β、IL-6在mRNA水平和蛋白水平的表達明顯減

7、少(P＜0.05)，切斷+煙堿組的IL-1β、IL-6、TNF-α的表達水平介于切斷組和煙堿組之間，并低于切斷組(P＜0.05)。在第7、14天，IFN-γ在假手術(shù)組、煙堿組、切斷組及切斷+煙堿組4組小鼠心肌中的表達無統(tǒng)計學(xué)差異。
　　結(jié)論:在病毒性心肌炎小鼠模型中，迷走神經(jīng)切斷使心肌組織炎癥損傷加重，心肌TNF-α、IL-1β、IL-6在基因和蛋白水平表達增加，左室縮短分數(shù)及射血分數(shù)下降，心功能惡化，而煙堿治療使心肌病理損傷明顯