神經(jīng)生長(zhǎng)因子受體p75和Trka在糖尿病大鼠膀胱和腰骶背根神經(jīng)節(jié)的表達(dá).pdf

1、目的：通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究正常及糖尿病大鼠膀胱組織及背根神經(jīng)節(jié) (dorsal root ganglia，DRG) 中神經(jīng)生長(zhǎng)因子(Nerve growth factor，NGF)受體p75和trka的表達(dá)情況，分析糖尿病膀胱病變(diabetic cystopathy，DC)與膀胱組織及DRG中P75和trka受體表達(dá)的相關(guān)性，說(shuō)明P75和trka在DC發(fā)生發(fā)展中的作用，進(jìn)一步探討DC的發(fā)病機(jī)制，為應(yīng)用NGF治療DC奠定理論基礎(chǔ)。

2、 方法：所用動(dòng)物為Sprague-Dawley(SD)成年雌性大鼠，由河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。成年雌性SD大鼠35只，體重200-250g，隨機(jī)分成2組，對(duì)照組15只，糖尿病模型組20只。應(yīng)用STZ單次腹腔注射誘導(dǎo)糖尿病大鼠模型，注射劑量為60mg/kg，對(duì)照組腹腔注射等體積的枸椽酸緩沖液。兩組均給予普通飼料飼喂，鼠飼料購(gòu)自河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，自由進(jìn)食進(jìn)水。注射STZ 72小時(shí)后測(cè)尾靜脈血葡萄糖濃度(blood glucos

3、e,BG)。BG>16.7mmol/L為模型成功。于造模成功8周后檢測(cè)兩組動(dòng)物尾靜脈血葡萄糖濃度，低于16.7mmol/L的大鼠仍被排除。 兩組均于造模成功后8周進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)前1天測(cè)定代謝籠24小時(shí)尿量。5％水合氯醛麻醉，分別用生理鹽水和含0.1％DEPC的4％多聚甲醛的0.1mol/L膦酸緩沖液(pH7.4)進(jìn)行全身灌注，切取完整膀胱和兩側(cè)腰6骶1DRG，稱(chēng)量膀胱濕重，所有標(biāo)本立即固定。蘇木素—伊紅(HE)染色，光鏡下觀察糖

4、尿病大鼠膀胱逼尿肌與DRG的形態(tài)學(xué)變化，結(jié)合兩組大鼠的血糖、體重、膀胱濕重、24小時(shí)尿量的變化確認(rèn)實(shí)驗(yàn)組糖尿病膀胱病變的形成。應(yīng)用免疫組化方法檢測(cè)膀胱組織和DRG神經(jīng)元內(nèi)p75和trka的表達(dá)情況。鏡下觀察結(jié)果，膀胱逼尿肌細(xì)胞內(nèi)或DRG$O經(jīng)元內(nèi)含有棕黃色顆粒為陽(yáng)性。每張切片在高倍鏡(×400)下選擇8—10個(gè)視野并記數(shù)100個(gè)細(xì)胞，判斷標(biāo)準(zhǔn)：陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)<10％為陰性表達(dá)(－)，=10％、<30％為弱陽(yáng)性(+)，=30％、<60％為中度

5、陽(yáng)性表達(dá)(++)，=60％為強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)(+++)。統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：結(jié)果以均數(shù)采用±標(biāo)準(zhǔn)差表示，應(yīng)用SPSS13.0系統(tǒng)軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)(方差不齊時(shí)做 t'檢驗(yàn))及等級(jí)資料秩和檢驗(yàn)，P<0.05認(rèn)為差異有顯著性。 結(jié)果 1 血糖、體重、代謝籠24小時(shí)尿量及膀胱濕重的變化大鼠腹腔注射STZ 72小時(shí)后，血糖已經(jīng)升高。8周時(shí)，糖尿病組(n=20)的血糖明顯高于對(duì)照組(n=15)，糖尿病組血糖與對(duì)照組比較 (30.900±3.2942

6、 vs 4.787±0.2973)(mmol/L)，差異有顯著性(P=0.000)。 糖尿病組(n=20)體重明顯下降，糖尿病組體重與對(duì)照組(n=15)比較(248.05±15.517 vs 322.80±15.920)(g)，差異有顯著性(P=0.000)。 8 周時(shí)代謝籠24小時(shí)尿量增加，糖尿病組(n=20)尿量與對(duì)照組(n=15)H5較(88.310±7.2223 vs 20.927±2.9004)(ml)，差異有

7、顯著性(P=0.000)。 糖尿病組(n=20)膀胱濕重增加，糖尿病組膀胱濕重與對(duì)照組(n=1.5)比較(171.15±6.081 vs 135.53±5.330)(mg)，差異有顯著性(P=0.000)。 2 HE染色與免疫組化檢測(cè)光鏡下觀察兩組大鼠逼尿肌結(jié)構(gòu)表現(xiàn)，對(duì)照組：可見(jiàn)移形上皮細(xì)胞排列整齊，固有膜完整。粘膜下及肌間神經(jīng)叢多見(jiàn)。逼尿肌細(xì)胞大小形態(tài)均一，肌纖維排列有序，肌束之間結(jié)構(gòu)緊密，間隙被結(jié)締組織所充滿(mǎn)。糖尿病組：粘膜

8、下層有明顯的嗜酸細(xì)胞浸潤(rùn)，固有膜充血水腫，逼尿肌肌細(xì)胞肥大，形態(tài)多樣，肌束排列紊亂松散，肌束橫斷面飽滿(mǎn)，體積增加。肌束之間間隙明顯增寬，膠原及纖維組織增生，肌束間小血管充血，神經(jīng)束可見(jiàn)。根據(jù)以上結(jié)果可以確認(rèn)，糖尿病膀胱病變已經(jīng)形成。 免疫組化結(jié)果為：p75在膀胱壁黏膜下、固有膜和逼尿肌細(xì)胞內(nèi)均有分布，和正常組相比，糖尿病組表達(dá)明顯減少；p75在DRG主要分布在細(xì)胞漿內(nèi)，和正常組相比，糖尿病組表達(dá)明顯減少。trka在膀胱壁主要分布