子宮內(nèi)膜異位癥在位和異位子宮內(nèi)膜神經(jīng)生長因子及其受體TrkA、p75的表達和患者疼痛的關(guān)系.pdf

1、子宮內(nèi)膜異位癥(endometriosis，EMs)是一種婦科常見病，好發(fā)于育齡婦女的雌激素依賴性疾病，常表現(xiàn)為慢性盆腔痛/痛經(jīng)和不孕，其中疼痛是EMs的特征性臨床癥狀，嚴重影響患者的生活質(zhì)量。EMs按病灶分布、臨床表現(xiàn)、處理及預(yù)后的不同將其分為腹膜型(PeritonealEndometriosis，PEM)、卵巢型(OvarianEndometiosis，OEM)、深部浸潤型(DeepInfiltratingEndometriosis

2、，DIE)及其他部位(OtherEndometriosis，OtEM)4種類型。雖然這四種類型均能引起不同類型及不同程度的臨床疼痛癥狀，但深部浸潤型相關(guān)的疼痛最明顯，因此，目前對深部浸潤型相關(guān)疼痛的研究報道較多，但是關(guān)于子宮內(nèi)膜異位癥的疼痛機制至今尚不清楚。
　　 EMs患者所致的疼痛目前認為可能與局部前列腺素增高、炎癥性細胞因子異常以及異位病灶機械性牽拉等因素有關(guān)，但明確的發(fā)病機制至今仍不清楚。近年研究發(fā)現(xiàn)，神經(jīng)生長因子通過與

3、神經(jīng)細胞受體的結(jié)合，實現(xiàn)神經(jīng)細胞的增殖、分化，在誘導(dǎo)神經(jīng)肽的同時增加感覺神經(jīng)元的數(shù)量，對EMs的疼痛及痛覺過敏的發(fā)生有重要影響。
　　 神經(jīng)生長因子(nervegrowthfactor，NGF)是一種具有神經(jīng)元營養(yǎng)和促神經(jīng)突起生長雙重生物學(xué)功能的神經(jīng)細胞生長調(diào)節(jié)因子，對中樞及周圍神經(jīng)元的發(fā)育、分化、生長、再生和功能特性的表達均具有重要的調(diào)控作用。NGF包含α，β和γ三個亞單位，活性區(qū)是β亞單位，由兩個118個氨基酸組成的單鏈通過

4、非共價鍵結(jié)合而成的二聚體。其主要分布于腦、神經(jīng)節(jié)、虹膜、心臟、脾、胎盤等組織及成纖維細胞、平滑肌、骨骼肌、膠質(zhì)細胞、雪旺細胞等部位。NGF有兩種受體，高親和力受體(TrkA受體)和低親和力受體(p75受體)。TrkA由3部分組成：即辨別并結(jié)合NGF的細胞外部、跨膜部及含酪氨酸激酶的胞質(zhì)部。TrkA是NGF的功能性受體，當其與NGF結(jié)合后，可激活酪氨酸激酶信號傳遞系統(tǒng)，從而啟動細胞活性，產(chǎn)生生物效應(yīng)。p75受體是由400個氨基酸構(gòu)成的膜蛋

5、白，屬于腫瘤壞死因子家族?？稍黾覶rkA酪氨酸激酶活力，從而產(chǎn)生信號傳遞，最終提高自由基清除劑，如過氧化物酶、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過氧化酶等活性，穩(wěn)定細胞內(nèi)Na+/K+、改變興奮性氨基酸(EAAs)受體NMDA對EAAs的反應(yīng)性，緩解EAAs的毒性，保持細胞內(nèi)Ca2+水平的穩(wěn)定。NGF的作用機制為與受體結(jié)合，通過受體介導(dǎo)的內(nèi)吞機制，形成由軸膜包繞、含有NGF、并保持其生物活性的小泡，經(jīng)軸突沿微管逆轉(zhuǎn)運至胞體，經(jīng)酪氨酸蛋白激酶、脂酰肌

6、醇鈣、內(nèi)源性環(huán)腺苷酸等第二信使體系的轉(zhuǎn)導(dǎo)，啟動一系列的級聯(lián)反應(yīng)，對靶細胞的某些結(jié)構(gòu)或功能蛋白基因的表達進行調(diào)控而發(fā)揮其生物效應(yīng)。
　　 NGF及其受體p75和TrkA是否涉及EMs的發(fā)病和疼痛機制長期未受關(guān)注。最近，Tokushige等應(yīng)用免疫組化方法檢測EMs腹膜異位病灶中NGF和NGFRp75的表達，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，腹膜異位病灶NGF和NGFRp75的表達顯著高于正常腹膜，提示，NGF和NGFRp75可能參與EMs的發(fā)病。同樣也有

7、研究發(fā)現(xiàn)，EMs患者不同類型的異位病灶均有NGF的高表達，且與患者疼痛癥狀的嚴重程度密切相關(guān)，但NGF的特異性受體(TrkA)卻不在EMs異位病灶中表達，而在臨近異位病灶的神經(jīng)纖維包括腹下神經(jīng)和卵巢神經(jīng)上表達。提示TrkA更可能涉及EMs患者的疼痛癥狀。迄今為止尚有一些未知內(nèi)容：NGF及其受體在非EMs在位子官內(nèi)膜、EMs在位內(nèi)膜中表達情況，在疼痛和無疼痛EMs患者內(nèi)異病灶中的表達差別，在其他部位：如腹壁子宮內(nèi)膜異位結(jié)節(jié)(Abdomin

8、alEndometriosisNode，AEM)的表達情況，仍需進一步研究。
　　 基于以上的研究背景，我們設(shè)計了本實驗，采用NGF及其受體TrkA及p75作為檢測指標來檢測各種EMs病灶中的表達，旨在探討神經(jīng)生長因子及其受體在子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)病和疼痛機制中的作用，為臨床研究EMs疼痛發(fā)生機制提供實驗室依據(jù)。
　　 研究目的：
　　 通過對疼痛和無疼痛的以及不同類型的子宮內(nèi)膜異位癥患者在位內(nèi)膜及異位內(nèi)膜病灶中神經(jīng)

9、生長因子(NGF)及受體(TrkA和p75)的表達，探討神經(jīng)生長因子及其受體與子宮內(nèi)膜異位癥患者疼痛之間的關(guān)系。
　　 材料和方法：
　　 1、研究對象：選擇2008年6月至2011年6月就診于浙江大學(xué)附屬婦產(chǎn)科醫(yī)院或杭州市第一人民醫(yī)院住院手術(shù)并經(jīng)病理證實為子宮內(nèi)膜異位癥的患者97例，其中(DIE35例，OEM42例，腹壁內(nèi)異結(jié)節(jié)20例)，對照組為同期在杭州市第一人民醫(yī)院住院手術(shù)并經(jīng)病理確診為子宮肌瘤且不伴疼痛患者的正常

10、子宮內(nèi)膜組織和正常宮骶韌帶組織。
　　 2、研究方法
　　 2.1、神經(jīng)生長因子及其受體的檢測
　　 應(yīng)用免疫組化法檢測NGF、TrkA及p75在子宮內(nèi)膜異位癥患者病灶以及在位內(nèi)膜中的表達。
　　 2.2、采用視覺模擬(VAS)評分方法給EMs組患者進行術(shù)前疼痛評分?；镜姆椒ㄊ鞘褂靡粭l長約10cm的游動標尺，一面標有10個刻度，兩端分別“0”分端和“10”分端，“0”分表示無痛，“10”分代表難以忍受的

11、最劇烈的疼痛，臨床使用時將有刻度的一面背向病人，讓病人在直尺上標出能代表自己疼痛程度的相應(yīng)位置，醫(yī)師根據(jù)病人標出的位置為其評出分數(shù)。選擇“10”或者“0”分的病例。
　　 3、統(tǒng)計方法
　　 采用SPSS16.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析。每組H-SCORES的結(jié)果采用平均數(shù)±標準差表示，各組蛋白表達的比較采用非參數(shù)檢驗，以P<0.05表示差異具有顯著性。
　　 結(jié)果：
　　 1、DIE病灶中NGF、TrkA及p

12、75的表達顯著高于正常官骶韌帶組織(p<0.05)，而DIE疼痛患者組僅p75的表達高于DIE無疼痛患者組(p<0.05)。
　　 2、EMs患者在位內(nèi)膜中NGF、TrkA及p75的表達顯著高于非EMs子宮內(nèi)膜(p<0.05)，但EMs疼痛患者組在位內(nèi)膜僅p75的表達顯著高于EMs無疼痛組(p<0.05)。
　　 3、NGF及TrkA表達于卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫的血管上皮及其間質(zhì)內(nèi)，疼痛組與非疼痛組之間無明顯差異(p>0.

13、05)，而p75僅表達在疼痛患者子宮內(nèi)膜異位囊腫的間質(zhì)內(nèi)，顯著高于無疼痛組的表達，兩組之間具有顯著性差異(p<0.05)。
　　 4、EMs患者病灶內(nèi)的NGF的表達量依次為：DIE>OEM>AEM(p<0.05)。TrkA在三組中未見明顯差異(p>0.05)。p75在DIE中表達量最高(p<0.05)，其他兩組間未見明顯差異(p>0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1、DIE病灶中NGF、TrkA及p75的表達顯著

14、高于正常宮骶韌帶組織，以及EMs患者在位內(nèi)膜NGF、TrkA及p75的表達顯著高于非EMs在位子宮內(nèi)膜，提示NGF及其受體TrkA及p75可能參與了子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)生和發(fā)展。
　　 2、DIE疼痛患者組、內(nèi)異疼痛組的在位內(nèi)膜和卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫疼痛組，在本課題研究指標中，均僅有p75的表達高于相對應(yīng)的無疼痛患者組，提示p75在EMs疼痛機制研究中可能是個較好的指標，其可能參與了疼痛的發(fā)生。
　　 3、DIE病灶中NG