乙型肝炎肝硬化患者FoxP3 mRNA表達及血清IL-12、 IL-18水平的變化.pdf

1、 目的：慢性乙型肝炎病毒感染的發(fā)病機制與機體免疫反應(yīng)關(guān)系密切,近年來關(guān)于CD4+CD25+Treg細胞在HBV感染者中的功能和作用,日益成為研究的焦點。明確Treg細胞對效應(yīng)T細胞及相關(guān)細胞因子的免疫耐受狀態(tài)的調(diào)控機理,對于有效終止病毒持續(xù)感染具有重要意義。FoxP3是目前公認的CD4+CD25+Treg細胞的最具特異性的轉(zhuǎn)錄因子,通過檢測FoxP3 mRNA的表達情況,可準(zhǔn)確反映 CD4+CD25+Treg 細胞的活性水平。本實驗旨

2、在初步探討慢性乙型肝炎、乙型肝炎肝硬化患者 FoxP3 mRNA 表達及血清中IL-12、IL-18 水平變化及其意義,并分析外周血FoxP3 mRNA表達與血清IL-12、IL-18水平的相關(guān)關(guān)系,以及外周血FoxP3 mRNA表達、血清IL-12、IL-18水平與病毒載量的相關(guān)關(guān)系。方法：1.提取健康對照組、慢性乙型肝炎組、乙型肝炎肝硬化組新鮮血液中的總RNA,逆轉(zhuǎn)錄成cDNA；實時熒光定量PCR(Real-Time PCR)擴增檢

3、測健康對照組、慢性乙型肝炎組、乙型肝炎肝硬化組FoxP3 mRNA的表達水平,并分析外周血FoxP3 mRNA表達與病毒載量的相關(guān)關(guān)系。2.采用 ELISA 方法測定健康對照組、慢性乙型肝炎組、乙型肝炎肝硬化組血清的IL-12、IL-18水平,并分析血清IL-12 、IL-18水平與病毒載量的相關(guān)關(guān)系。3.分析健康對照組、慢性乙型肝炎組、乙型肝炎肝硬化組三組研究對象FoxP3 mRNA表達及IL-12 、 IL-18水平的變化及其相關(guān)關(guān)

4、系。4.分別測定并分析健康對照組、慢性乙型肝炎組、乙型肝炎肝炎肝硬化組的血清學(xué)指標(biāo),包括ALT、AST、ALB、PTA、HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb、HBV-DNA 定量。結(jié)果：1.慢性乙型肝炎、乙型肝炎肝硬化組的FoxP3 mRNA表達及IL-12、 IL-18水平,和正常健康組比較明顯升高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；2.進一步兩兩比較：健康對照組與乙型肝炎肝硬化組、健康對照組與慢性乙型肝炎組組間

5、FoxP3的Mann-Whitney U值為0.000,兩組間有統(tǒng)計學(xué)差異(p=0.000, P<0.05)；慢性乙型肝炎與乙型肝炎肝硬化組組間：Mann-Whitney U值為225.500,兩組間無統(tǒng)計學(xué)差異(p=0.189,p>0.05)；健康對照組與乙型肝炎肝硬化組 IL-12 的 Mann-Whitney U 值為 24.000,差異有統(tǒng)計學(xué)差異(p=0.000,p<0.05)；健康對照組與慢性乙型肝炎組Mann-Whitne

6、y U值為12.000,( p=0.000,p<0.05)組間有統(tǒng)計學(xué)差異；慢性乙型肝炎與乙型肝炎肝硬化組間：Mann-Whitney U 值為 264.000,兩組無統(tǒng)計學(xué)差異( p=0.597 , p>0.05 )；健康對照組與乙型肝炎肝硬化組 IL-18 的Mann-Whitney U值為7.000,組間有統(tǒng)計學(xué)差異( p=0.000,p<0.05)；健康對照組與慢性乙型肝炎組：Mann-Whitney U值為36.000 ,組間

7、有統(tǒng)計學(xué)意義( p=0.025,p<0.05)；慢性乙型肝炎與乙型肝炎肝硬化組：Mann-Whitney U值為223.000,兩組無統(tǒng)計學(xué)差異( p=0.173,p>0.05)。3.采用 Spearman 相關(guān)系數(shù)方法對慢性乙型肝炎感染者 FoxP3 mRNA 與IL-12、IL-18水平作相關(guān)性分析,FoxP3 mRNA與IL-12(r=-0.297,P=0.059),兩者水平無相關(guān)關(guān)系；FoxP3 mRNA與IL-18(r=-0.

8、242,P=0.078) ,兩者水平無相關(guān)關(guān)系；4. 采用 Spearman 相關(guān)系數(shù)方法對慢性乙型肝炎感染者IL-12與IL-18作相關(guān)性分析(r=0.828,p=0.000),兩者之間呈正相關(guān)關(guān)系。5. 采用 Spearman 相關(guān)系數(shù)方法對慢性乙型肝炎感染者病毒載量與 FoxP3mRNA水平作相關(guān)性分析：HBV-DNA與FoxP3 mRNA (r=0.830,P=0.031) ,兩者之間呈正相關(guān)關(guān)系；采用Spearman相關(guān)系數(shù)方

9、法對慢性乙型肝炎感染者病毒載量與血清 IL-12、IL-18 水平作相關(guān)性分析：HBV-DNA 與IL-12(r=-0.459 , P=0.000)、HBV-DNA 與 IL-18(r=-0.328 , P=0.015) , HBV-DNA與IL-12和IL-18兩者水平為負相關(guān)關(guān)系,即隨著IL-12、IL-18的升高HBV-DNA呈現(xiàn)下降的趨勢。結(jié)論：1.本實驗發(fā)現(xiàn),慢性乙型肝炎、乙型肝炎肝硬化患者外周血FoxP3 mRNA表達高于健

10、康對照組(P<0.05),并且與 HBV-DNA 載量呈正相關(guān)關(guān)系,表明 FoxP3 mRNA 的異常升高(即CD4+CD25+Treg細胞活性增強) 抑制了效應(yīng)性T細胞免疫反應(yīng),導(dǎo)致機體的免疫應(yīng)答能力下降產(chǎn)生免疫耐受,使 HBV 不能被有效清除引起持續(xù)的感染,促使疾病向慢性化方向發(fā)展,其機制可能為慢性病毒性肝炎患者體內(nèi)的炎性反應(yīng),產(chǎn)生一些細胞因子刺激Treg細胞的增生而引起FoxP3 mRNA的表達異常。2.慢性乙肝患者血清細胞因子

11、IL-12、IL-18 的異常升高可能是Th1/Th2細胞失平衡的結(jié)果,在乙型肝炎慢性化的進程中發(fā)揮作用,參與了病毒性肝炎肝炎肝硬化患者的肝臟炎性損傷的過程。3. 在慢性乙型肝炎、乙型肝炎肝硬化患者中病毒載量與血清中細胞因子IL-12、IL-18為負相關(guān)關(guān)系,表現(xiàn)為隨著血清中細胞因子IL-12、IL-18的升高出現(xiàn)病毒載量的下降。由于細胞免疫的增強,有利于病毒的清除,與此同時由于Th1細胞占優(yōu)勢,增強了 CD8+T 細胞的活性,也會進一