人肺腺癌轉(zhuǎn)移相關(guān)分子的定量蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、肺癌是目前全球發(fā)病率和死亡率較高的惡性腫瘤之一，肺癌按組織學(xué)分類一般分為鱗癌、腺癌、大細(xì)胞癌和小細(xì)胞癌四型。近年來，人肺腺癌(lung adenocarcinoma，AdC)的發(fā)病率逐步上升，且病人的死亡率高、預(yù)后較差。肺腺癌死亡率高和預(yù)后差的主要原因是癌細(xì)胞易轉(zhuǎn)移。臨床上，對(duì)肺腺癌進(jìn)行早期發(fā)現(xiàn)或控制癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移是降低其死亡率的有效手段。癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移是一個(gè)極其復(fù)雜的過程，涉及多因素、多階段和多基因的參與，眾多的正或負(fù)相關(guān)基因起著促進(jìn)或抑制癌

2、細(xì)胞轉(zhuǎn)移的作用。然而，這些基因大多都是通過翻譯成蛋白質(zhì)來行使其促進(jìn)或抑制癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的功能。因此，直接篩選人肺腺癌轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白質(zhì)將為尋找能預(yù)測轉(zhuǎn)移的分子標(biāo)志物或臨床治療靶標(biāo)奠定基礎(chǔ)。 為了篩選肺腺癌轉(zhuǎn)移相關(guān)的蛋白質(zhì)，依據(jù)臨床診斷選取無轉(zhuǎn)移的原發(fā)性肺腺癌組織和有轉(zhuǎn)移的原發(fā)性肺腺癌組織作為研究對(duì)象，首先采用激光捕獲顯微切割(laser capture microdissection，LCM)技術(shù)對(duì)兩組原發(fā)性肺腺癌組織中的癌細(xì)胞進(jìn)行純化

3、，再利用雙向熒光差異凝膠電泳技術(shù) (two-dimensional fluoresence difference gel electrophoresis，2D-DIGE)分離無轉(zhuǎn)移肺腺癌組和有轉(zhuǎn)移肺腺癌組中純化的癌細(xì)胞總蛋白，通過Decyder軟件分析兩組差異表達(dá)的蛋白質(zhì)點(diǎn)，質(zhì)譜(mass spectrometry，MS)技術(shù)對(duì)差異表達(dá)的蛋白質(zhì)點(diǎn)進(jìn)行鑒定，Western blot驗(yàn)證部分差異蛋白質(zhì)S100A9，B23，annex

4、in Al，annexin A2和annexin A3的表達(dá)。為探討部分差異蛋白質(zhì)表達(dá)的臨床病理意義，采用免疫組化染色檢測部分差異蛋白質(zhì)在存檔的石蠟包埋組織中的表達(dá)，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析差異蛋白質(zhì)的表達(dá)水平與肺腺癌臨床病理因素及患者復(fù)發(fā)和預(yù)后的關(guān)系。 本研究建立了LCM純化的無轉(zhuǎn)移和有轉(zhuǎn)移肺腺癌組織中癌細(xì)胞的2D-DIGE圖譜，質(zhì)譜鑒定了20個(gè)非冗余差異蛋白質(zhì)。與無轉(zhuǎn)移肺腺癌組相比，13個(gè)蛋白在有轉(zhuǎn)移肺腺癌組表達(dá)上調(diào)，7個(gè)蛋白在有轉(zhuǎn)移肺腺

5、癌組中表達(dá)下調(diào)。Westem blot驗(yàn)證分析顯示，差異蛋白S100A9，annexin A1，annexin A2和annexin A3的表達(dá)水平在有轉(zhuǎn)移肺腺癌組中較無轉(zhuǎn)移肺腺癌組增高；B23的表達(dá)水平在有轉(zhuǎn)移肺腺癌組中較無轉(zhuǎn)移肺腺癌組降低。免疫組化進(jìn)一步證實(shí)：與肺腺癌原發(fā)癌組織相比，annexin Al，annexin A2，annexin A3的表達(dá)水平在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌組織中表達(dá)上調(diào)。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析發(fā)現(xiàn)annexin A1，annexi

6、n A2和annexin A3的表達(dá)水平與肺腺癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分期有關(guān)。Kaplan-Meier曲線和Cox回歸分析進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)，annexinA1，annexin A2和annexin A3的表達(dá)水平與肺腺癌患者的復(fù)發(fā)和預(yù)后有關(guān)，annexin A1，annexin A2或annexin A3高表達(dá)的肺腺癌患者易復(fù)發(fā)，且生存率低，預(yù)后差。 本研究首次應(yīng)用LCM方法聯(lián)合2D-DIGE及MS技術(shù)，分析、鑒定出人肺腺癌轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白