人參皂苷Rg3、索拉非尼、奧沙利鉑不同聯(lián)合方案抗人肝癌細胞株侵襲與轉移的實驗研究.pdf

1、目的：
　　 通過體外實驗觀察人參皂苷Rg3、索拉非尼、奧沙利鉑單藥、兩藥聯(lián)合、三藥聯(lián)合作用對人肝癌細胞株SMMC-7721增殖、黏附和侵襲的作用，并探討其相關機制，為中藥與化療和分子靶向藥物聯(lián)合應用提供理論依據(jù)。
　　 方法：
　　 選擇人類肝癌細胞株SMMC-7721細胞為研究對象，通過增殖抑制實驗法(MTT法)、細胞黏附實驗、細胞遷移實驗、細胞體外侵襲實驗和免疫細胞化學方法系統(tǒng)觀察人參皂苷Rg3、奧沙利鉑、

2、索拉非尼單藥或聯(lián)合對SMMC-7721細胞的抑制黏附、侵襲與轉移的作用和表達CD44V6、MMP-9、VEGF-C基因蛋白的影響。
　　 結果：
　　 MTT法結果顯示，人參皂苷Rg3（7.5μg/ml）、索拉非尼（1.25μmol/L）、奧沙利鉑（0.25μg/ml）單藥、兩藥聯(lián)合（人參皂苷Rg3+索拉非尼，索拉非尼+奧沙利鉑，奧沙利鉑+人參皂苷Rg3）、三藥聯(lián)合（人參皂苷Rg3+索拉非尼+奧沙利鉑）對SMMC-772

3、1細胞均有抑制增殖的作用，各組藥物在作用24h時對細胞的增殖抑制率均小于15％。(2)用MTT法檢測黏附于FN上1h、2h的SMMC-7721細胞，人參皂苷Rg3作用2h與1h比較，黏附抑制率具有統(tǒng)計學差異(P＜0.05)。當三藥相互兩兩聯(lián)合（人參皂苷Rg3+索拉非尼，索拉非尼+奧沙利鉑，奧沙利鉑+人參皂苷Rg3）時黏附1h，表現(xiàn)為協(xié)同作用(Q＞1.15)；黏附2h時，索拉非尼聯(lián)合奧沙利鉑或人參皂苷Rg3，其抑制黏附作用均好于索拉非尼單

4、藥(P＜0.05)；但無論是黏附1h還是2h，三藥與兩藥組之間均未見明顯差異（P＞0.05）。用MTT法檢測黏附于Matrigel上1h、2h的SMMC-7721細胞，當三藥相互兩兩聯(lián)合時黏附1h，表現(xiàn)為協(xié)同作用(Q＞1.15)；黏附2h時，索拉非尼聯(lián)合奧沙利鉑或人參皂苷Rg3抑制黏附作用均好于索拉非尼(P＜0.05)，黏附2h時，三藥聯(lián)合比兩藥聯(lián)合體現(xiàn)了更好的抗黏附作用(P＜0.01)。(3)細胞遷移實驗表明，奧沙利鉑、索拉非尼單藥對

5、SMMC-7721細胞的遷移抑制作用較好；奧沙利鉑+人參皂苷Rg3比人參皂苷Rg3單藥抑制遷移作用明顯(P＜0.01)；奧沙利鉑+索拉非尼比索拉非尼單藥抑制遷移作用明顯(P＜0.01)；人參皂苷Rg3+索拉非尼比人參皂苷Rg3單藥抑制遷移作用明顯（P＜0.01）；奧沙利鉑+人參皂苷Rg3表現(xiàn)為相加作用，人參皂苷Rg3+索拉非尼與奧沙利鉑+索拉非尼表現(xiàn)為協(xié)同作用。三藥聯(lián)合抑制遷移作用優(yōu)于人參皂苷Rg3+索拉非尼組及奧沙利鉑+人參皂苷Rg3

6、組(P＜0.01)。(4)細胞侵襲實驗表明，奧沙利鉑、索拉非尼單藥對SMMC-7721細胞的侵襲抑制作用較好；奧沙利鉑+人參皂苷Rg3比人參皂苷Rg3單藥抑制侵襲作用明顯(P＜0.01)；奧沙利鉑+索拉非尼比索拉非尼單藥抑制侵襲作用明顯(P＜0.01)；人參皂苷Rg3+索拉非尼比人參皂苷Rg3單藥抑制侵襲作用明顯(P＜0.01)；奧沙利鉑+人參皂苷Rg3與奧沙利鉑+索拉非尼表現(xiàn)為相加作用；三藥聯(lián)合比人參皂苷Rg3+索拉非尼組及奧沙利鉑+

7、人參皂苷Rg3抑制侵襲作用明顯(P＜0.05)。(5)免疫細胞化學法結果表明，人參皂苷Rg3可使SMMC-7721細胞CD44V6及MMP-9表達減弱(P＜0.05)，奧沙利鉑可使SMMC-7721細胞CD44V6、VEGF-C、MMP-9表達減弱(P＜0.05)；索拉非尼可使VEGF-C、MMP-9表達減弱(P＜0.05)：兩藥聯(lián)合（人參皂苷Rg3+索拉非尼，索拉非尼+奧沙利鉑，奧沙利鉑+人參皂苷Rg3）對VEGF-C蛋白的影響，明顯

8、高于單藥(P＜0.01)；對CD44V6蛋白的影響，索拉非尼+奧沙利鉑及奧沙利鉑+人參皂苷Rg3兩藥組優(yōu)于單藥(P＜0.05)，人參皂苷Rg3+索拉非尼聯(lián)合優(yōu)于索拉非尼(P＜0.05)；對MMP-9蛋白影響方面，索拉非尼+奧沙利鉑優(yōu)于索拉非尼單藥(P＜0.05)，奧沙利鉑+人參皂苷Rg3優(yōu)于人參皂苷Rg3(P＜0.05)；三藥聯(lián)合組較兩藥聯(lián)合組使相關蛋白CD44V6、VEGF-C、MMP-9的表達減弱更明顯(P＜0.01)。
　　

9、 結論：
　　 (1)人參皂苷Rg3、索拉非尼、奧沙利鉑單藥及兩藥、三藥聯(lián)合對肝癌SMMC-7721細胞有一定的抑制黏附、遷移和侵襲的能力；在抑制SMMC-7721細胞黏附方面，奧沙利鉑與人參皂苷Rg3抗黏附作用較強，三藥相互兩兩聯(lián)合時體現(xiàn)協(xié)同作用，三藥聯(lián)合后抗細胞黏附作用最大；而在抑制SMMC-7721細胞遷移侵襲方面，奧沙利鉑與索拉非尼作用較強，三藥相互兩兩聯(lián)合時體現(xiàn)協(xié)同或相加作用，三者聯(lián)合后抗細胞遷移侵襲作用最強。