桃紅四物湯對(duì)大鼠激素性股骨頭缺血性壞死TGF-β-,1-表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：建立大鼠激素性股骨頭缺血性壞死模型，觀察桃紅四物湯對(duì)激素性股骨頭缺血性壞死大鼠轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(transforming growth factor-β1，TGF—β1)表達(dá)的影響，探討桃紅四物湯防治激素性股骨頭壞死的作用機(jī)制，進(jìn)一步為活血化瘀法防治激素性股骨頭缺血性壞死和臨床推廣應(yīng)用提供理論依據(jù)。 方法：采用清潔級(jí)SD大鼠40只，雌雄各半，體重200±20g，首先隨機(jī)分為兩組：空白組4只和模型組36只，模型組每周2次腹腔

2、注射醋酸潑尼松龍24.5mg/kg，經(jīng)6周誘導(dǎo)出激素性股骨頭缺血性壞死的早期模型；空白組每周2次腹腔注射同等劑量的生理鹽水。6周后處死空白組4只和模型組4只，進(jìn)行光、電鏡觀察，確定造模成功；隨后將其余32只模型組大鼠隨機(jī)分為治療組16只和對(duì)照組16只，分別灌服中藥和生理鹽水，于灌胃后第6、8周時(shí)期在麻醉下，腹主動(dòng)脈取血，化學(xué)比色法檢測(cè)血清中堿性磷酸酶、Elisa(酶聯(lián)免疫吸附法)檢測(cè)血清中TGF-β1的含量；應(yīng)用RT—PCR(反轉(zhuǎn)錄-聚

3、合酶鏈反應(yīng))技術(shù)檢測(cè)股骨頭局部TGF—β1mRNA的轉(zhuǎn)錄，免疫組化法檢測(cè)股骨頭局部微血管密度和股骨頭局部TGF-β1的表達(dá)。 結(jié)果：1、大體觀察：短期內(nèi)大劑量使用激素使模型組動(dòng)物體重一直下降，灌胃后，治療組動(dòng)物體重較對(duì)照組體重回升顯著(P<0.05)。2、組織病理學(xué)觀察：激素可使模型組空缺骨陷窩數(shù)明顯增多，骨小梁細(xì)疏，髓腔脂肪細(xì)胞增大、增多，與空白組有明顯差異(P<0.01)。3、電鏡觀察：模型組骨細(xì)胞數(shù)量減少，退變固縮或出現(xiàn)出

4、現(xiàn)脂滴，成骨細(xì)胞減少，髓內(nèi)脂肪細(xì)胞增大、增多，空白組骨細(xì)胞富含粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，多聚核糖體多，線粒體發(fā)達(dá)，嵴結(jié)構(gòu)清晰，核異染色質(zhì)豐富，核仁可見。4、股骨頭局部血管微密度：治療組股骨頭局部血管微密度逐漸增高，對(duì)照組股骨頭局部微血管密度較治療組明顯減低，兩組相比有明顯差異(P<0.01)。5、免疫組化檢測(cè)TGF-β1的表達(dá)，圖像分析儀分析：治療組股骨頭局部TGF—β1較對(duì)照組表達(dá)明顯增強(qiáng)，兩組有明顯差異(P<0.01)。6、血清中堿性磷酸酶含量檢

5、測(cè)：對(duì)照組血清中堿性磷酸酶含量增高，與對(duì)照組相比，兩組有顯著差異(P<0.01)。7、血清中TGF—β1含量檢測(cè)：治療組血清中TGF—β1的表達(dá)增強(qiáng)，與對(duì)照組相比有明顯差異(P<0.01)。8、股骨頭局部TGF-β1mRNA的轉(zhuǎn)錄：治療組在第6周時(shí)表達(dá)即增強(qiáng)，在第8周時(shí)表達(dá)又降低，而對(duì)照組在第6周時(shí)表達(dá)減少，在第8周時(shí)未檢測(cè)到TGF—β1mRNA的表達(dá)，兩組差異顯著(P<0.05，P<0.01)。TGF—β1mRNA與血清和股骨頭局部T

6、GF—β1的表達(dá)具有一致性。 結(jié)論：1、大鼠腹腔醋酸潑尼松龍注射加間斷立位股骨頭缺血性壞死造模穩(wěn)定，重復(fù)性好。2、桃紅四物湯能通過促進(jìn)激素性股骨頭缺血性壞死大鼠模型股骨頭局部TGF-β1mRNA的轉(zhuǎn)錄水平，促進(jìn)股骨頭局部TGF-β1表達(dá)。3、桃紅四物湯能通過促進(jìn)激素性股骨頭缺血性壞死大鼠模型TGF-β1的表達(dá)，從而可以有效促進(jìn)股骨頭局部微血管的再生。4、桃紅四物湯能對(duì)抗激素的作用，拮抗激素引起的骨質(zhì)破壞，降低血清中ALP的含量。