體外不同培養(yǎng)時間影響CD3-CD56+NK細胞數(shù)量及活性變化的研究.pdf

1、背景
　　 19世紀80年代興起的細胞過繼免疫治療帶給了腫瘤患者一個新的希望。自然殺傷(natural killer.NK)細胞作為機體抗腫瘤的第一道防線，再加上其對腫瘤細胞的殺傷作用是由其表面抑制性受體和活化性受體的共同信號決定，所以NK細胞成為近年細胞過繼免疫治療的研究熱點。但NK細胞在外周血中的數(shù)量有限且在體外難以培養(yǎng)，所以NK細胞的體外培養(yǎng)就成為一項影響NK細胞過繼免疫治療臨床療效的關鍵步驟，影響NK細胞的培養(yǎng)因素眾多，

2、而培養(yǎng)時間是一個基本的但又不可避免的影響因素。近年來多項研究提示異體半相合NK細胞在造血干細胞移植和過繼性細胞免疫治療方面均顯示出對人類血液系統(tǒng)腫瘤的積極治療作用，但自體NK細胞過繼免疫治療的臨床效果卻不能令人滿意。這就促使我們對異體（通常是健康人群）NK細胞培養(yǎng)后的細胞數(shù)量（細胞存活率、NK細胞的百分率和T細胞的百分率）及活性（NK細胞對K562細胞和RPIM8226細胞的殺傷活性）變化與培養(yǎng)時間的關系進行充分的了解；以及健康人群與A

3、ML患者NK細胞培養(yǎng)后的細胞數(shù)量（細胞存活率、NK細胞的百分率和T細胞的百分率）及活性（NK細胞對K562細胞和RPIM8226細胞的殺傷活性）的差異進行充分的了解。
　　 目的
　　 探討健康人群NK細胞在培養(yǎng)過程中隨培養(yǎng)時間的變化，細胞數(shù)量、細胞存活率、NK細胞的百分率、T細胞的百分率及NK細胞對K562細胞和RPIM8226細胞的殺傷活性的變化，確定健康人群NK細胞的最佳培養(yǎng)時間；同時與AML患者NK細胞培養(yǎng)過程中

4、細胞數(shù)量、細胞存活率、NK細胞的百分率和T細胞的百分率及對K562細胞和RPIM8226細胞的殺傷活性的變化的進行比較，明確兩者之間的差異。為異體NK細胞免疫治療更好的應用于臨床做準備。
　　 方法
　　 1.采取10例健康志愿者和山西省腫瘤醫(yī)院血液科10例AML患者外周血15ml，運用常規(guī)單個核細胞提取法提取單個核細胞，分別放于含有SCGM培養(yǎng)基的培養(yǎng)孔中培養(yǎng)，前Sd加入0.5ulCD3McAb，在培養(yǎng)的第Sd，倒掉含

5、有CD3McAb的培養(yǎng)液，加入含有rhIL-2的SCGM培養(yǎng)基。隔日補充一次培養(yǎng)液，直至第25d。
　　 2.運用細胞計數(shù)儀檢測培養(yǎng)第0d、5d、10d、15d、20d及第25d的細胞數(shù)量及細胞存活率。
　　 3.運用流式細胞儀檢測培養(yǎng)第0d、5d、10d、15d、20d及25d細胞中的NK細胞百分率和T細胞百分率。
　　 4.采用比色法檢測培養(yǎng)第0d、5d、10d、15d、20d及25d分選出的NK細胞對K56

6、2細胞和RPMI8226細胞的殺傷活性。
　　 結論
　　 1.總細胞和NK細胞的數(shù)量、NK細胞的百分率、NK細胞對K562細胞和RPMI8226細胞的殺傷活性與培養(yǎng)時間呈正相關；T細胞的百分率與培養(yǎng)時間程負相關。也就是說，NK細胞的數(shù)量及活性在一定培養(yǎng)時間內(nèi)，隨著培養(yǎng)時間的延長而增加。
　　 2.健康志愿者和AML患者相比，總細胞數(shù)在培養(yǎng)的第20d開始出現(xiàn)顯著性差異；NK細胞的百分率在培養(yǎng)的第10d開始出現(xiàn)顯著

7、性差異；NK細胞對RPMI8226的殺傷活性在培養(yǎng)的第15d開始出現(xiàn)顯著性差異；細胞存活率、T細胞的百分率、NK細胞對K562細胞的殺傷活性在培養(yǎng)期間沒有出現(xiàn)顯著性差異。健康志愿者的NK細胞培養(yǎng)之后優(yōu)于AML患者的NK細胞。
　　 3.健康志愿者的NK細胞在培養(yǎng)的第20d，總細胞和NK細胞的數(shù)量、NK細胞的百分率、NK細胞對K562細胞和RPMI8226細胞的殺傷活性均達到最佳狀態(tài)，故健康志愿者即健康人群NK細胞的最佳培養(yǎng)時間間