重組人表皮生長因子和本芴醇的聚乙二醇修飾研究.pdf

1、隨著藥物研究的快速發(fā)展，通過聚乙二醇(polyethylene glycol，PEG)修飾來提高藥物藥效和順應(yīng)性已成為藥學(xué)研究的一門重點。如蛋白質(zhì)多肽類藥物的穩(wěn)定性差、半衰期短、免疫原性等缺陷和化學(xué)藥物水溶差、毒性大等不足都限制了它們的給藥途徑和藥效的發(fā)揮。 重組人表皮生長因子(rhEGF)為具有53個氨基酸殘基、理論相對分子量為6045的單鏈多肽，現(xiàn)階段主要用于消化道潰瘍、口腔潰瘍、燒傷創(chuàng)面、糖尿病足壞疽皮膚等的治療。但其在胃

2、液和創(chuàng)面的穩(wěn)定性較差，常規(guī)制劑已不能滿足治療的需要。而復(fù)方蒿甲醚(一片片劑含蒿甲醚20mg和本芴醇120mg)作為WHO推崇的治療瘧疾一線藥物在臨床上已取得較好的療效。但就本芴醇而言，其吸收緩慢、生物利用度低影響了它的藥效發(fā)揮，故可以考慮結(jié)構(gòu)改造來改善本芴醇的上述不足，以求達到本芴醇的單獨給藥目的。 通過聚乙二醇修飾可為上述問題的解決提供有益的借鑒和參考。本課題主要分為三部分：(1)PEG修飾劑的合成(2)重組人表皮生長因子(r

3、ecombination humanendermal growth factor．rhEGF)的PEG修飾(3)本芴醇的PEG修飾及其生物利用度研究。 第一部分：課題涉及3種PEG修飾劑的合成：單甲氧基聚乙二醇胺(mPEG-NH<,2>)、單甲氧基聚乙二醇琥珀酸琥珀酰亞胺酯(mPEG<,5k>-SSA)、單甲氧基聚乙二醇丙醛(mPEG5k-propionaldehyde)。首先用原料單甲氧基聚乙二醇(mPEG<,5k>-OH)通

4、過酯化和還原得到mPEG-NH<,2>。再由mPEG-NH<,2>與琥珀酸酐及氮羥基琥珀酰亞胺(NHS)反應(yīng)制得mPEG<,5k>-SSA。mPEG<,5k>-propionaldehyde是以mPEG<,5k>-OH為原料與3-氯丙醛二乙基縮醛反應(yīng)先得到縮醛化合物，再在弱酸條件下分解生成醛類化合物。通過核磁共振(NMR)和紅外(IR)檢測證實所得產(chǎn)品為目標(biāo)產(chǎn)物。 第二部分：rhEGF的PEG修飾，酯類修飾劑(mPEG<,5k>

5、-SSA和mPEG<,20k>-NHS)在pH8.0的磷酸緩沖鹽溶液中與rhEGF進行偶合反應(yīng)，摩爾比為PEG：rhEGF=9：1；醛類修飾劑(mPEG<,5k>-propionaldehyde和mPEG<,5k>-ALD)在pH5.5的醋酸緩沖液中與rhEGF進行偶合反應(yīng)，摩爾比為PEG：rhEGF=3：1，并在硼氫甲腈鈉還原下生成穩(wěn)定的腙類化合物。通過四種修飾劑的修飾可得到不同修飾率和修飾度(修飾度：蛋白上連接PEG的個數(shù))的產(chǎn)物。

6、mPEG<,5k>-SSA修飾生成含有兩種不同修飾度的產(chǎn)品，mPEG<,20k>-NHS修飾生成一種修飾度的產(chǎn)品，mPEG<,5k>-propionaldehyde和mPEG<,5k>-ALD的修飾產(chǎn)品修飾度均為1。 第三部分：本芴醇的聚乙二醇修飾及其生物利用度研究，首先由本芴醇與琥珀酸酐反應(yīng)得到含酯鍵的本芴醇琥珀酸，再與第一部分實驗合成的mPEG-NH<,2>進行脫水反應(yīng)生成可降解的水溶性PEG化本芴醇。通過質(zhì)譜分析確證修飾產(chǎn)

7、品為目標(biāo)產(chǎn)物。并通過進一步的性質(zhì)分析確證產(chǎn)物的純度為86.71％，其中游離本芴醇占2.37％，其它為原料PEG。穩(wěn)定性研究中發(fā)現(xiàn)其穩(wěn)定性較差，在甲醇中三小時后降解53.83％。 在體內(nèi)吸收研究中，取SD大鼠八只，隨機分為本芴醇組(對照組)和PEG化本芴醇組(每組各含四只，雌雄各半)，腸溶膠囊給與藥物(避免胃酸水解PEG化本芴醇)，一次性給與本芴醇15mg/kg和等摩爾量的PEG化本芴醇151mg/kg(PEG化本芴醇與本芴醇的分