乙型肝炎病毒前S1缺失突變對病毒生物學活性的影響研究.pdf

1、目的:分析乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus，HBV)前S缺失突變在慢性乙型肝炎輕中度、慢性乙型肝炎重度和慢加急性肝衰竭患者中的檢出率;分析前S1缺失突變病毒株體外復制力、HBsAg分泌、RNA水平、前S1抗原表達及其對表面抗原啟動子Ⅱ（Surface antigen promoter Ⅱ，SPⅡ）轉(zhuǎn)錄活性的影響。
　　方法:研究對象為119例于2005年8月-2008年5月在解放軍第三○二醫(yī)院診療的住院患者，包括3

2、8例慢性乙型肝炎（以下簡稱慢乙肝）輕中度、40例慢乙肝重度和41例慢加急性肝衰竭患者。從患者血清中提取HBVDNA，PCR擴增獲得HBV全長基因組序列，統(tǒng)計前S缺失突變的發(fā)生率。挑選有代表性的前S1缺失突變株及其相應對照的野生型HBV全長序列克隆至pGEM-Teasy載體中。用BspQⅠ/ScaⅠ雙酶切1.0倍HBV基因組，72小時后檢測體外病毒復制力及HBsAg表達水平，同樣的方法轉(zhuǎn)染HepG2細胞，72小時后提取HBVRNA，用相對

3、熒光定量法檢測RNA水平。構建1.1倍pTriEX-HBV(C)表達載體，轉(zhuǎn)染HepG2細胞，72小時后，酶聯(lián)免疫法測前S1抗原的表達。用PCR分別擴增含有前S1缺失突變型和野生型的HBVSPⅡ啟動子片段，構建pGL3-SPⅡ雙熒光素酶真核報告表達載體，轉(zhuǎn)染細胞48小時后檢測相對熒光素酶活性，分析前S1區(qū)缺失突變對重疊的SPⅡ啟動子區(qū)熒光素酶活性表達的影響。
　　結果:①HBV基因組前S缺失突變檢出率在慢乙肝輕中度、慢乙肝重度和慢

4、加急性肝衰竭三組中逐漸遞增，分別為5.3％、12.5％和24.4％，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。②與未缺失野生株相比，前S1缺失突變病毒株的體外復制力和分泌的HBsAg水平分別降低了69％和23.7％;前S1缺失株的3.5kb前基因組RNA、2.4kbmRNA和2.1kbmRNA水平分別降低了87.67％、91.40％和85.94％。③與未缺失野生株相比，前S1區(qū)缺失導致前S1抗原表達消失。④與未缺失野生型相比，前S1缺失突變使重