降鈣素基因相關(guān)肽與高血壓及吳茱萸次堿的治療作用.pdf

1、研究背景:降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)是辣椒素敏感感覺(jué)神經(jīng)的主要遞質(zhì)，在外周神經(jīng)系統(tǒng)，背根神經(jīng)節(jié)(DGR)是合成CGRP的主要部位。CGRP隨外周感覺(jué)神經(jīng)廣泛分布于心血管組織，是目前己知最強(qiáng)的舒血管物質(zhì)，在維持循環(huán)穩(wěn)定中起重要作用。新近研究發(fā)現(xiàn)，非神經(jīng)組織細(xì)胞如淋巴細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞也能合成CGRP，通過(guò)自分泌或旁分泌而發(fā)揮作用。CGRP的合成與釋放主要受辣椒素受體(VR1)調(diào)節(jié)CGRP在高血壓的發(fā)生發(fā)展中起重要作用。原發(fā)性高血壓患者及自發(fā)

2、性高血壓大鼠(SHR)血漿CGRP濃度降低，被認(rèn)為是血壓升高的重要原因；在繼發(fā)性高血壓患者(如醛固酮增多癥)或兩腎一夾高血壓大鼠(2K1C)，CGRP血漿濃度增高，可能是對(duì)抗血壓升高的有益代償。在不同原因引起的高血壓中CGRP濃度差異的原因尚未闡明。 N-花生四烯酸乙醇胺(AEA)是VR1的內(nèi)源性配體，體內(nèi)多種細(xì)胞可合成AEA，包括內(nèi)皮細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和單核細(xì)胞等。VR1定位于細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)，因此其相應(yīng)配體需要進(jìn)入細(xì)胞膜內(nèi)才能發(fā)揮作用

3、。血漿或組織液中的AEA進(jìn)入靶細(xì)胞依賴于細(xì)胞膜上AEA轉(zhuǎn)運(yùn)體，現(xiàn)已證明轉(zhuǎn)運(yùn)體途徑是細(xì)胞外AEA進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的主要方式。因此，血漿中AEA水平及AEA轉(zhuǎn)運(yùn)體活性可能是影響機(jī)體CGRP合成與釋放的重要因素。AEA轉(zhuǎn)運(yùn)體活性可受一氧化氮(NO)及外源性一氧化氮合酶抑制物(L-NAME)影響。 本實(shí)驗(yàn)通過(guò)比較分析原發(fā)性高血壓患者與自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)及兩腎一夾高血壓大鼠(2K1C)AEA與CGRP水平變化，并觀察高血壓動(dòng)物淋巴細(xì)胞A

4、EA轉(zhuǎn)運(yùn)體活性對(duì)CGRP合成與釋放的影響及ADMA對(duì)AEA轉(zhuǎn)運(yùn)體活性的影響，以探討AEA轉(zhuǎn)運(yùn)體活性變化在高血壓發(fā)生發(fā)展中的作用。 方法: 臨床實(shí)驗(yàn):在未經(jīng)治療原發(fā)性高血壓患者及正常人，測(cè)量血壓，測(cè)定血漿CGRP及AEA濃度。 動(dòng)物實(shí)驗(yàn):在SHR與WKY大鼠(正常對(duì)照)，兩腎一夾高血壓大鼠(2K1C)與正常大鼠(假手術(shù)處理)比較實(shí)驗(yàn)中，分別測(cè)量血壓(尾動(dòng)脈測(cè)壓法)，檢測(cè)血漿中CGRP(放射免疫分析法)、AEA(液質(zhì)

5、聯(lián)用法)、非對(duì)稱二甲基精氨酸(ADMA)(高效液相色譜法)及一氧化氮(NO)(硝基還原法)；取大鼠背根神經(jīng)節(jié)檢測(cè)α-CGRPmRNA及β-CGRPmRNA表達(dá)量(熒光定量實(shí)時(shí)PCR)；檢測(cè)AEA轉(zhuǎn)運(yùn)體攝取活性(同位素標(biāo)記法)。 細(xì)胞實(shí)驗(yàn):取正常Wistar大鼠外周血淋巴細(xì)胞，以熒光定量PCR法檢測(cè)AEA對(duì)細(xì)胞CGRPmRNA合成的影響，并觀察AEA轉(zhuǎn)運(yùn)體抑制劑AM404對(duì)其影響；以同位素標(biāo)記法檢測(cè)ADMA對(duì)淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)體活性影響

6、。 結(jié)果:原發(fā)性高血壓患者血漿中AEA水平升高，CGRP濃度降低。同樣，SHR血漿AEA水平升高，CGRP濃度降低，DRG中α-CGRPmRNA及β-CGRPmRNA表達(dá)量降低；而2K1C血漿AEA水平升高，CGRP濃度升高，DRG中α-CGRPmRNA及β-CGRPmRNA表達(dá)量升高。SHR的淋巴細(xì)胞AEA轉(zhuǎn)運(yùn)體攝取活性降低，血漿中ADMA水平升高，NO水平降低；2K1C大鼠AEA轉(zhuǎn)運(yùn)體攝取活性、ADMA及NO水平無(wú)明顯變化。