益氣養(yǎng)陰活血法治療糖尿病腎病大鼠的療效觀察.pdf

1、目的:本研究通過首先建立糖尿病(DM)動物模型,進(jìn)而發(fā)展為糖尿病腎病(DN),應(yīng)用益氣養(yǎng)陰活血中藥對該模型進(jìn)行干預(yù),通過觀察實(shí)驗(yàn)動物的空腹血糖、24小時(shí)尿蛋白定量、尿β2微球蛋白、血清果糖胺、血脂、腎功能、腎臟病理形態(tài)學(xué)變化、腎皮質(zhì)中糖基化終產(chǎn)物(AGEs)及其受體mRNA(RAGE—mRNA)等的表達(dá),研究益氣養(yǎng)陰活血中藥對糖尿病腎病的治療作用及其可能機(jī)制,為其臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)和理論依據(jù)。
　　 方法:選用清潔級雄性健康S

2、D大鼠40只,體重200g±20g,普通飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)一周,代謝籠取尿檢測尿糖和尿蛋白均為陰性,隨機(jī)抽10只為正常對照組(normal group,Normal),其余30只按60mg·kg-1腹腔注射鏈尿佐菌素(STZ),72h后尾尖取血,測定血糖,取尿測尿糖。血糖>16.7mmol·L-1,尿糖陽性,尿蛋白陽性,尿量大于正常組150％視為成模。將成模大鼠隨機(jī)分為:糖尿病腎病模型組(DN-Modol group,Model)、中藥復(fù)方

3、治療組(Chinese herbal compound group,ZY)、貝那普利治療組(Benazepril group,Benazepril),n=10。各組均不給予任何降糖西藥。治療各組在成模后一周開始按成人劑量的20倍給藥,正常組和模型組給予相應(yīng)量的蒸餾水灌胃(1ml/100mg),各組共給藥8周。于第8周末用代謝籠收集24小時(shí)尿液,檢測24小時(shí)尿蛋白(urinary protein,Upro)定量及尿β2微球蛋白(尿β2-M

4、G)。最后一次給藥后,禁食8小時(shí),腹主動脈取血,分離血清,檢測空腹血糖(fasting blood glucose,FBG),尿素氮(bloodurea nitrogen,BUN),血肌酐(serum creatinine,Cr),血總膽固醇(totalcholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、血清果糖胺(FMN)、血白蛋白(ALB)。無菌操作取腎臟,去掉包膜摘取腎臟稱重計(jì)算肥大指數(shù),取小塊的腎組織固定

5、,甲醛固定用于觀察腎臟病理改變及免疫組織化學(xué)方法檢測腎皮質(zhì)糖基化終產(chǎn)物(AGEs)的表達(dá)；液氮固定用于RT-PCR檢測糖基化終產(chǎn)物受體mRNA(RAGE-mRNA)的表達(dá)。血、尿生化指標(biāo)均用全自動生化分析儀測定。
　　 結(jié)果:
　　 1實(shí)驗(yàn)大鼠的一般情況
　　 正常組大鼠飲食正常,眼睛有神,反應(yīng)敏捷,被毛緊披,肌肉豐滿,糞便成麥粒狀,尿量正常。其余3組注射STZ后,均出現(xiàn)明顯的多飲多食多尿癥狀,并慢慢出現(xiàn)精神萎靡

6、,反應(yīng)遲鈍,少動抱團(tuán)。實(shí)驗(yàn)最后一周,與正常組相比造模各組大鼠明顯體型瘦小,骨骼突出,肌肉偏少,上述癥狀以模型組最為顯著。
　　 2各組大鼠體重、右腎重、肥大指數(shù)(腎重/體重)的比較
　　 模型組、貝那普利組、中藥組大鼠體重比正常組明顯偏輕(P<0.01),而三個(gè)造模組各組之間大鼠體重?zé)o顯著性差異(P>0.05)；正常組與造模各組大鼠右腎重?zé)o顯著性差異(P>0.05)；模型組、貝那普利組、中藥組大鼠腎臟肥大指數(shù)與正常組相比

7、明顯偏高(P<0.01),而模型組與兩個(gè)治療組之間無顯著性差異(P>0.05)。
　　 3各組大鼠空腹血糖(FPG)的比較
　　 模型組FPG明顯高于正常組,有顯著性差異(P<0.01),經(jīng)用藥干預(yù)后,兩治療組與模型組相比無顯著性差異(P>0.05)。貝那普利組與中藥組相比無顯著性差異(P>0.05)。
　　 4各組大鼠血白蛋白(ALB),24小時(shí)尿蛋白定量(UPRO)及尿β2微球蛋白(尿β2-MG)的比較

8、>　　 模型組及治療組大鼠血漿白蛋白明顯低于正常組,但兩個(gè)治療組的血漿白蛋白值明顯高于模型組,P<0.05,兩組之間比較無顯著性差異；模型大鼠尿蛋白定量明顯高于正常組,經(jīng)兩藥治療后尿蛋白定量明顯下降,兩個(gè)治療組大鼠尿蛋白定量明顯低于模型組,P<0.05,但中藥治療組要高于貝那普利組；尿β2微球蛋白的結(jié)果與尿蛋白定量基本一致。
　　 5各組大鼠血清果糖胺(FMN)的比較
　　 模型組、貝那普利組、中藥組各組大鼠血清果糖胺

9、比正常組明顯升高(P<0.01),而模型組、貝那普利組、中藥組之間無顯著性差異(P>0.05)。
　　 6各組大鼠血脂的比較
　　 造模各組血清總膽固醇(TC)明顯高于正常組(P<0.01),中藥組比模型組明顯偏低(P<0.01),而貝那普利組與模型組之間比較無顯著性差異(P>0.05)。
　　 對于甘油三酯(TG),兩個(gè)治療組均低于模型組(P<0.01),而兩個(gè)治療組與正常組比較無顯著性差異(P>0.05)。<

10、br>　　 7各組大鼠腎功能的比較
　　 與正常組相比,模型組肌酐(Scr)明顯升高,有顯著性差異(p<0.05)。治療組與模型組相比明顯下降,有顯著性差異(p<0.05)。中藥組和貝那普利組之間無明顯差異(p>0.05)。
　　 對于尿素氮(BUN),兩治療組與正常組也均明顯低于模型組(p<0.01),而與正常組相比,貝那普利組和中藥組則有所升高(p<0.01),兩者之間的升高水平無顯著性差異(p>0.05)。

11、>　　 8腎臟病理形態(tài)學(xué)觀察
　　 正常組腎小球結(jié)構(gòu)完整,未見腎小球肥大,腎小球毛細(xì)血管基底膜、系膜、基質(zhì)未見明顯異常改變；模型組可見腎小球肥大,腎小球毛細(xì)血管基底膜增厚,腎小球系膜細(xì)胞增生、系膜基質(zhì)增多,系膜區(qū)增寬；貝那普利組與中藥復(fù)方治療組也均有不同程度病理改變,但與模型組相比病變較輕。
　　 9免疫組化觀察結(jié)果
　　 AGEs彌散分布于腎小管內(nèi),腎小球內(nèi)基本無表達(dá)。半定量分析結(jié)果顯示,與正常組相比,模型組

12、的表達(dá)要明顯加強(qiáng)(P<0.01),而兩個(gè)治療組的表達(dá)也明顯強(qiáng)于正常組(P<0.01),貝那普利組和中藥治療組之間的比較則無明顯差異(P>0.05)。
　　 10 PT-PCR分析結(jié)果
　　 結(jié)果顯示:正常組中RAGE-mRNA基本無表達(dá),模型組出現(xiàn)高表達(dá)條帶,而與模型組相相比,中藥組和貝那普利組腎臟中RAGE-mRNA表達(dá)均有所下降。
　　 結(jié)論:
　　 1益氣養(yǎng)陰活血中藥可以減少糖尿病大鼠的尿蛋白,升高

13、血白蛋白,降低血清TC,TG,改善脂質(zhì)代謝；降低血清果糖胺；降低BUN及Scr,保護(hù)腎功能。
　　 2益氣養(yǎng)陰活血中藥可以有效的抑制DN大鼠腎小球毛細(xì)血管基底膜的增厚、系膜基質(zhì)的增生以及足細(xì)胞的融合,延緩腎臟病理的進(jìn)展。
　　 3益氣養(yǎng)陰活血中藥可以抑制DN大鼠腎組織中AGEs的表達(dá)。
　　 4益氣養(yǎng)陰活血中藥可以抑制DN大鼠腎組織中RAGE-mRNA的表達(dá),提示益氣養(yǎng)陰活血中藥可能通過抑制AGEs的產(chǎn)生以及AG