水溶性酵母β-1，3-葡聚糖的酶法制備及其抗腫瘤活性研究.pdf

1、酵母β-1，3-葡聚糖是一種生物活性強、毒副作用低的高效生物應(yīng)答物，但直接提取得到的酵母β-1，3-葡聚糖的水溶性差，使其應(yīng)用受到了很大限制。利用β-1，3-葡聚糖酶對β-1，3-葡聚糖進(jìn)行酶解增溶，將極大地拓寬其在醫(yī)藥、食品及化妝品等行業(yè)中的應(yīng)用。本試驗以酵母β-1，3-葡聚糖為原料，利用β-1，3-葡聚糖酶酶解技術(shù)和超濾分離技術(shù)獲得大分子量的水溶性酵母葡聚糖，并對其進(jìn)行了體外抗氧化和體內(nèi)抗腫瘤、抗氧化活性研究，主要結(jié)論如下：

2、 1.酵母β-1，3-葡聚糖酶解條件的研究。利用木霉菌株LE02所產(chǎn)β-1，3-葡聚糖酶對啤酒酵母葡聚糖進(jìn)行酶解，研究了反應(yīng)溫度、反應(yīng)pH、底物濃度、酶用量以及酶解時間對酶解產(chǎn)物中可溶性多糖得率的影響，最佳酶解條件為：反應(yīng)溫度55℃，反應(yīng)pH值4.5，底物濃度20％，酶濃度4 U/mL，酶解時間2 h。酶解液經(jīng)Sephadex G-100凝膠色譜分離可分為組分Ⅰ(大分子量多糖)、組分Ⅱ(寡聚糖)和組分Ⅲ(小分子量低聚糖和單糖)；隨著水解

3、時間延長，組分Ⅰ比例下降、而組分Ⅲ的比例迅速上升。高效液相色譜顯示酶解產(chǎn)物有3個組分，其中大于30 kD的組分占總量的66.2％。 2.利用超濾技術(shù)對酶解液進(jìn)行分離。研究了超濾膜截留分子量、超濾溫度、超濾壓力和超濾時間對可溶性多糖得率及膜通量變化的影響，最終確定超濾條件為：膜PES-10(截留分子量10 kD)、壓力0.2 MPa、溫度40℃，超濾90 min，超濾后獲得截留級分Ⅰ(WSG Ⅰ)、透過級分Ⅱ(WSGⅡ)，其中截留

4、級分Ⅰ中總糖含量為24.23mg/mL，透過級分Ⅱ中總糖含量4.52 mg/mL，截留級分Ⅰ與透過級分Ⅱ總糖比例達(dá)到了5.26。截留級分Ⅰ中可溶性多糖占的比例達(dá)到了94.8％。 3.研究了WSG Ⅰ對體外大鼠紅細(xì)胞溶血、大鼠肝組織勻漿及肝線粒體脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA生成的影響。WSG Ⅰ在一定濃度范圍內(nèi)能抑制小鼠紅細(xì)胞溶血，抑制小鼠肝組織勻漿及肝線粒體MDA的生成和肝線粒體腫脹，劑量一效應(yīng)關(guān)系明顯，說明WSG Ⅰ具有體外對小鼠細(xì)胞

5、器(肝線粒體)、細(xì)胞(紅細(xì)胞)及組織(肝)層次的抗氧化作用。WSG Ⅰ具有一定的抗氧化效果。 4.WSG Ⅰ體內(nèi)抗腫瘤及抗氧化活性研究。研究了給藥方式、水溶性葡聚糖與羧甲基葡聚糖對腫瘤小鼠抑瘤率、胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)的影響，并測定了脂質(zhì)過氧化物丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)活力等抗氧化指標(biāo)。WSG Ⅰ(Mw>10kD)對荷瘤小鼠體內(nèi)腫瘤有很好的抑制效果，高劑量組抑制率達(dá)到了49.