溫陽(yáng)利濕通絡(luò)法對(duì)阿霉素腎病大鼠治療作用的理論與實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：腎病綜合征(Nephrotic syndrome，NS)是臨床上常見(jiàn)多發(fā)的疾病，西醫(yī)治療難度大，而中醫(yī)治療取得了顯著成果，故從新的理論總結(jié)開(kāi)始，開(kāi)展了本課題研究。本課題分為理論探討和實(shí)驗(yàn)研究?jī)纱蟛糠?，以邱幸凡教授提出的“臟虛絡(luò)痹”病機(jī)理論為基礎(chǔ)，擬定了溫陽(yáng)利濕通絡(luò)方，運(yùn)用現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究方法，深入研究了該方對(duì)阿霉素誘導(dǎo)的腎病綜合征大鼠模型的治療作用及其部分機(jī)制，目的在于為臨床NS的治療提供新的理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 理論探討：

2、
　　 1、基于絡(luò)脈絡(luò)病理論及“臟虛絡(luò)痹”的病機(jī)理論，提出“腎脾陽(yáng)虛，濕瘀阻絡(luò)”是NS的基本病機(jī)：(1)腎脾陽(yáng)虛是致病之本：腎脾陽(yáng)虛是NS的基本病機(jī)；(2)濕瘀阻絡(luò)為致病之標(biāo)：濕瘀阻絡(luò)是NS發(fā)生的病理關(guān)鍵；(3)臟虛絡(luò)痹相互影響，互為因果。
　　 2、根據(jù)病機(jī)，提出“溫腎補(bǔ)脾，利濕泄?jié)?，化瘀通絡(luò)”是NS的基本治療法則：(1)補(bǔ)臟以治其本：以補(bǔ)脾腎之陽(yáng)為基本；(2)通絡(luò)以治其標(biāo)：“利濕泄?jié)?，化瘀通絡(luò)”是治療NS的關(guān)鍵；

3、r>　　 3、提出治療NS的方藥為“溫陽(yáng)利濕通絡(luò)方”。該方由熟附片10g、黃芪30g、黨參10g、白術(shù)10g、澤瀉10g、車前子15g、水蛭6g和蟬蛻10g組成。
　　 方法：本研究采用尾靜脈一次性注射阿霉素6mg/kg的方法建立阿霉素誘導(dǎo)的腎病綜合征大鼠模型，即按Bertani法造模，進(jìn)行了溫陽(yáng)利濕通絡(luò)方干預(yù)該模型的實(shí)驗(yàn)研究。將40只Wistar雄性大鼠，隨機(jī)分為正常組(n=10)、模型組(n=10)、中藥組(n=10)、西

4、藥組(n=10)。造模成功后，正常組和模型組灌生理鹽水(1ml/100g體重)；中藥組灌溫陽(yáng)利濕通絡(luò)方(1ml/100g體重)；西藥組灌鹽酸貝那普利溶液(0.3mg/100g體重)，均每日一次，連續(xù)灌胃四周。給藥期間每天觀察食量、體毛、大便、精神狀態(tài)、體重及水腫情況。尿標(biāo)本檢測(cè)24小時(shí)尿蛋白定量(24HUPQ)、β2微球蛋白(β2-MG)、尿白蛋白(ALB)，采用干化學(xué)法檢測(cè)；血標(biāo)本檢測(cè)血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、總蛋白(TP)

5、、白蛋白(ALB)、甘油三酯(TG)和膽固醇(CHOL)，采用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定。ET-1、VEGF及TGF-β1的變化采用免疫組化法研究。TGF-β1mRNA的表達(dá)采用RT-PCR方法檢測(cè)。
　　 結(jié)果：
　　 1.對(duì)大鼠一般情況的觀察：正常組大鼠活動(dòng)靈活，反應(yīng)較快，皮毛致密、有光澤，沒(méi)有出現(xiàn)水腫；模型組大鼠造模后3天出現(xiàn)活動(dòng)減低，精神差、體毛翻轉(zhuǎn)凌亂、大便稀，食量減少，3周后出現(xiàn)水腫并逐漸加重，尤以腹水明顯；中藥組

6、與西藥組大鼠經(jīng)治療后，精神較模型組好，食量好，大便呈顆粒狀，活動(dòng)情況好轉(zhuǎn)，且水腫較輕。模型組、中藥組、西藥組在造模成功時(shí)，體重較正常組顯著下降(P＜0.01)；實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，中藥組和西藥組大鼠體重顯著高于模型組(P＜0.05)，而中藥組與西藥組之間無(wú)顯著性差異；
　　 2.對(duì)大鼠蛋白尿的影響：模型組、中藥組、西藥組于造模后第7天開(kāi)始，24HUPQ均明顯高于正常組(P＜0.01)，說(shuō)明造模成功。治療后第14、21、28天，中藥組的2

7、4HUPQ明顯低于模型組(P＜0.01)，中藥組與西藥組比較無(wú)顯著性差異。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，中藥組的尿β2-MG明顯低于模型組(P＜0.01)，尿ALB低于模型組(P＜0.05)。中藥組與西藥組比較無(wú)顯著性差異；
　　 3.對(duì)大鼠血脂的影響：實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，模型組大鼠TG、CHOL結(jié)果明顯高于正常組(P＜0.01)，中藥組和西藥組的TG結(jié)果低于模型組(P＜0.01)，中藥組與西藥組比較無(wú)顯著性差異；中藥組和西藥組的CHOL結(jié)果低于模型組(

8、P＜0.05)。中藥組與西藥組比較無(wú)顯著差異；
　　 4.對(duì)大鼠腎功能的影響：實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，模型組、中藥組、西藥組與正常組比較，血Scr、BUN的結(jié)果均無(wú)顯著性差異；
　　 5.對(duì)大鼠血清蛋白的影響：實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，模型組、中藥組、西藥組大鼠的TP、ALB結(jié)果均明顯低于正常組(P＜0.01)，中藥組和西藥組大鼠的TP、ALB結(jié)果高于模型組(P＜0.05)，而中藥組與西藥組之間無(wú)顯著性差異；
　　 6.對(duì)大鼠ET-1、V

9、EGF、TGF-β1及TGF-β1mRNA水平的影響：模型組與中藥組的ET-1、VEGF、TGF-β1及TGF-β1mRNA水平均明顯升高(與正常組相比，P＜0.01)，但中藥組的ET-1、VEGF、TGF-β1及TGF-β1mRNA水平較模型組顯著降低(P＜0.05)，中藥組與西藥組無(wú)顯著性差異；
　　 7.病理學(xué)觀察：在光鏡下，模型組大鼠HE及PAS染色病理切片有輕度系膜增生，其它各組腎小球及腎小管均未見(jiàn)明顯病理變化。在電鏡

10、下，正常組大鼠腎小球基底膜未見(jiàn)增厚，系膜未見(jiàn)增生，足突清晰完整，未見(jiàn)融合。模型組大鼠腎小球基底膜未見(jiàn)增厚，局部系膜細(xì)胞、基質(zhì)增生，足突間隙消失，足突廣泛融合，尚可見(jiàn)部分內(nèi)皮細(xì)胞異染色質(zhì)染色加深、成塊、趨邊，核孔增寬，出現(xiàn)細(xì)胞凋亡；模型組大鼠可見(jiàn)部分腎小管細(xì)胞周邊水腫，溶酶體增多。中藥組和西藥組，腎小球病變程度相似，基底膜平滑，未見(jiàn)增厚，系膜未見(jiàn)增生，足突部分融合，腎小管細(xì)胞結(jié)構(gòu)正常，與模型組比較，病變程度明顯較輕。
　　 結(jié)論:

11、本研究結(jié)果提示：溫陽(yáng)利濕通絡(luò)方能顯著改善阿霉素誘導(dǎo)的腎病綜合征大鼠的一般營(yíng)養(yǎng)狀況；提高阿霉素誘導(dǎo)的腎病綜合征大鼠血清白蛋白、總蛋白水平，降低大鼠蛋白尿、甘油三酯、膽固醇水平。該方對(duì)阿霉素誘導(dǎo)的腎病綜合征大鼠腎組織的超微結(jié)構(gòu)有改善作用。其治療機(jī)制可能與下調(diào)ET-1、VEGF、TGF-β1及TGF-β1mRNA水平有關(guān)，在降低ET-1、VEGF、TGF-β1及TGF-β1mRNA水平的過(guò)程中，減少了中性粒細(xì)胞和單核巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)，抑制炎癥細(xì)胞

12、的聚集活化和炎癥介質(zhì)的釋放，從而減輕足突細(xì)胞損傷，減少足突融合，達(dá)到保護(hù)腎小球?yàn)V過(guò)膜的結(jié)構(gòu)和功能的作用，最終降低尿蛋白，并且，因其減輕了腎臟免疫損傷，從而能調(diào)節(jié)蛋白和脂質(zhì)代謝，抑制脂質(zhì)過(guò)氧化物的形成，達(dá)到升高血清白蛋白，降低血脂的作用，因此，對(duì)ET-1、VEGF、TGF-β1及TGF-β1mRNA的研究，從細(xì)胞免疫及分子角度更深入闡明了溫陽(yáng)利濕通絡(luò)方對(duì)NS治療作用的分子機(jī)制。提示：溫陽(yáng)利濕通絡(luò)法及其方是中醫(yī)治療腎病綜合征的一種優(yōu)勢(shì)方法。