復(fù)發(fā)性流產(chǎn)與凝血相關(guān)基因和葉酸代謝相關(guān)基因的單核苷酸多態(tài)性的薈萃分析及關(guān)聯(lián)分析.pdf

1、背景：復(fù)發(fā)性流產(chǎn)(recurrent pregnancy loss，RPL)是一種常見的產(chǎn)科疾病。習(xí)慣上將其定義為連續(xù)3次或3次以上20孕周以前自然發(fā)生的流產(chǎn)，最近，美國生殖醫(yī)學(xué)學(xué)會將其定義為連續(xù)2次或2次以上自然發(fā)生的流產(chǎn)。它是一種病因復(fù)雜的疾病，遺傳和環(huán)境因素都能促進(jìn)其的發(fā)生和發(fā)展。
　　血栓形成被認(rèn)為是RPL的主要病因之一，尤其在妊娠的前半周期。凝血相關(guān)基因的多態(tài)性被認(rèn)為是遺傳性血栓形成的主要因素，并在妊娠的前或后半周期起作

2、用，導(dǎo)致流產(chǎn)的發(fā)生。高同型半胱氨酸血癥是很多妊娠相關(guān)疾病的獨立危險因素。葉酸是同型半胱氨酸代謝過程中的輔助因子，葉酸的缺乏會導(dǎo)致血液中同型半胱氨酸水平的升高。異常的葉酸代謝可能會影響同型半胱氨酸代謝相關(guān)的酶的活性，從而導(dǎo)致血液當(dāng)中同型半胱氨酸濃度的升高，最終導(dǎo)致流產(chǎn)的發(fā)生。因此，我們推測葉酸代謝相關(guān)基因的多態(tài)性也是RPL的危險因素。
　　目的：薈萃分析通過以往文獻(xiàn)研究凝血相關(guān)基因及葉酸代謝相關(guān)基因的單核苷酸多態(tài)性與RPL的相關(guān)性，

3、關(guān)聯(lián)分析進(jìn)一步通過實驗研究驗證凝血相關(guān)基因多態(tài)性與中國人群RPL的相關(guān)性及葉酸代謝相關(guān)基因多態(tài)性與中國人群早期RPL的相關(guān)性。
　　方法：查閱PubMed MEDLINE、EMBASE和CNKI數(shù)據(jù)庫鑒定到目前為止符合薈萃分析要求所有的英文和中文文獻(xiàn)。通過MIX1.7軟件，比較多態(tài)性位點eNOS intron4 VNTR和Asp298Glu(rs1799983), MTHFR C677T(rs1801133)和A1298C(rs1

4、801131)的基因型和等位基因與RPL的相關(guān)性。所有的統(tǒng)計分析，雙邊P值小于0.05被認(rèn)為有統(tǒng)計學(xué)意義。病例-對照研究病例組包含了104例至少發(fā)生了連續(xù)2次20孕周以前流產(chǎn)的病人，對照組包含了184例與病例組種族、年齡匹配，具有正常的月經(jīng)周期，至少有一次正常自然妊娠，沒有流產(chǎn)及其他妊娠并發(fā)癥史的健康人。從外周血細(xì)胞中提取基因組DNA，對6個凝血相關(guān)基因多態(tài)性位點SERPINC1 G786A(rs2227589), THBD C1418

5、T(rs1042579), TFPI T-33C(rs8176592),Factor V G1628A(rs6020), Factor// G19911A(rs3136516), ANXA5 C76T(rs113588187)和3個葉酸代謝相關(guān)基因多態(tài)性位點MTRR A66G(rs1801394)，SLC19A1 G80A(rs1051266)和C696T(rs12659)通過Sequenom公司的MassARRAY IPLEX檢測平臺

6、進(jìn)行檢測。其他的2個葉酸代謝相關(guān)基因的多態(tài)性位點MTHFR C677T(rs1801133)和A1298C(rs1801131)通過聚合酶鏈反應(yīng)后經(jīng)直接測序法進(jìn)行檢測。通過SPSS13.0版本，用卡方檢驗比較每個多態(tài)性位點的基因型及等位基因頻率在病例組和對照組中的差異。并對P值進(jìn)行Bonferroni校正。
　　結(jié)果：一:薈萃分析
　　1.結(jié)果顯示eNOS rs1799983的多態(tài)性與RPL相關(guān)(OR:1.67，95％ CI

7、:1.36-2.04，P＜0.001)，eNOS intron4 VNTR的多態(tài)性與RPL不存在相關(guān)性。分層分析顯示eNOSrs1799983的多態(tài)性與RPL的相關(guān)性僅存在于東亞人中(OR=1.88(1.52-2.33)，P＜0.001)，在高加索人中并不存在此相關(guān)性。
　　2.MTHFR rs1801133的多態(tài)性與RPL相關(guān)(OR:1.34，95％ CI:1.13-1.58; P＜0.0001).經(jīng)分析未發(fā)現(xiàn)MTHFR rs1

8、801131的多態(tài)性與RPL之間的相關(guān)性。分層分析后僅在東亞人中觀察到了MTHFR rs1801133的多態(tài)性與RPL相關(guān)性(OR=2.11(1.40-3.19)，P＜0.001)，在高加索人中未發(fā)現(xiàn)相關(guān)性。
　　二:病例-對照研究
　　1.THBD rs1042579的等位基因頻率在病例組和對照組中存在顯著性差異(OR=1.58，95％CI:1.05-2.39，P=0.027)。ESEfinder預(yù)測，發(fā)現(xiàn)rs104257

9、9影響THBDmRNA的剪接過程，進(jìn)而影響蛋白的表達(dá)。
　　2.其他的5個凝血相關(guān)基因多態(tài)性位點SERPINC1 rs2227589，TFPI rs8176592，F(xiàn)actor V rs6020，F(xiàn)actor// rs3136516，ANXA5 rs113588187的基因型和等位基因的頻率在病例組和對照組中均無差異。
　　3.MTHFR rs1801131多態(tài)性位點的基因型及等位基因的頻率在病例組和對照組有明顯的差異(AC

10、/AA，AOR=2.58，95％CI:1.40-4.74，P=0.002; AC+CC/AA，AOR=2.53，95％CI:1.40-4.57 P=0.002; C/A，OR=2.13，95％CI:1.27-3.57，P=0.004)。其他4個葉酸代謝相關(guān)基因的多態(tài)性位點的等位基因頻率在病例組和對照組中相似(MTHFRrs1801133(T/C, P=0.246), SLC19A1 rs1051266(A/G, P=0.165)和rs1

11、2659(T/C,P=0.158), MTRR rs1801394(G/A, P=0.241)。
　　4.在MTHFR rs1801133-rs1801131組成的四個單倍型中，單倍型rs1801133C-rs1801131C與早期RPL相關(guān)。SLC19A1 rs1051266-rs12659組成的單倍型與早期RPL不相關(guān)。單倍型MTHFR rs1801133C-rs1801131A和SLC19A1rs1051266G-rs126

12、59C在病例組中的頻率低于在對照組中的頻率，但是P值大于0.05(P=0.093和P=0.084)。
　　結(jié)論：薈萃分析結(jié)果顯示eNOS rs1799983和MTHFR rs1801133與RPL相關(guān)性僅存在于東亞人中，在高加索人中不存在。病例-對照研究發(fā)現(xiàn)THBD rs1042579與RPL相關(guān);MTHFR rs1801131與早期RPL相關(guān)。單倍型MTHFR rs1801133C-rs1801131C是早期RPL的危險因素;單