嚴重燒傷大鼠腸道Treg對T淋巴細胞免疫功能的影響和Th17-Treg變化對腸黏膜屏障損傷的影響.pdf

1、第一部分、嚴重燒傷大鼠腸道調節(jié)性T細胞(Treg)對T淋巴細胞免疫功能的影響
　　目的：體外分選嚴重燒傷后大鼠腸道淋巴結中CD3+T細胞及Treg細胞，予以不同濃度Treg與CD3+T細胞體外共培養(yǎng)，以此來探討Treg濃度的升高對腸道T細胞免疫功能的影響。
　　方法：將10只SD大鼠用控時控溫控壓蒸汽燙傷儀在每只大鼠背部造成全身體表面積為30％的III度燒傷，于傷后12小時頸椎脫臼處死大鼠，提取腸道淋巴細胞，抗原特異性玻璃柱

2、法純化CD3+T細胞，采用免疫磁珠分選技術分選CD4+CD25+Treg細胞，將純化后的CD3+T細胞隨機分成空白對照組和A、B、C、D共4個濃度組。各組CD3+T細胞均為106個，其中空白對照組不加Treg，各個濃度組分別加入1×104、2×104、5×104、1×105個分選好的Treg細胞，體外共培養(yǎng)12小時后，采用流式細胞技術檢測CD4+/CD8+T細胞、Th1/Th2細胞比例及T細胞凋亡率；采用ELISA方法檢測IL-2和IL

3、-10在培養(yǎng)液上清中的表達變化。
　　結果：
　?。?）嚴重燒傷后不同濃度的Treg作用于 T細胞后，隨著濃度升高，各組CD4+、CD8+T細胞數目逐步下降，CD4+/CD8+T細胞比例也隨之下降，與空白對照組(1.22±0.12)比較，A組(0.95±0.08)比例出現下降，D組(0.35±0.09)比例明顯下降，各組差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　?。?）嚴重燒傷后不同濃度的Treg細胞作用于T細胞后，與空

4、白對照組比較，各組Th1/Th2細胞比例逐漸下降，隨著濃度的升高，Th1細胞比例降低，Th2細胞比例明顯升高，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　?。?）嚴重燒傷后不同濃度的Treg作用于T細胞后，隨濃度升高，各組 T細胞總調亡率逐步升高，與空白對照組(32.04±1.84)比較，A組(35.25±2.04) T細胞總調亡率升高，D組（51.69±1.47）T細胞總調亡率明顯升高，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）
　　

5、（4）與空白對照組比較，隨濃度升高，各組培養(yǎng)上清液的IL-2表達下降，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；而IL-10表達升高，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　結論：大鼠嚴重燒傷后腸道Treg細胞的升高，可能參與了腸道的T細胞免疫紊亂的過程。隨著Treg濃度的升高，CD4+/CD8+T細胞比例也隨之下降，促進Th1向Th2飄移，T細胞凋亡率升高，IL-2表達下降、IL-10表達升高，產生免疫抑制狀態(tài)，適度減少Treg的數目或

6、抑制其活性，可能作為糾正燒傷后免疫功能抑制狀態(tài)的一個新的靶點。
　　第二部分、嚴重燒傷大鼠腸道Th17/Treg表達變化及其對腸黏膜屏障損傷的影響
　　目的：觀察嚴重燒傷后大鼠腸道淋巴結輔助性T17細胞（Th17）及調節(jié)性T細胞（Treg）比例變化情況，門靜脈血及腸黏膜組織中IL-17A、IL-6水平變化及腸黏膜損傷程度，初步探討Th17/Treg及Th17相關細胞因子變化對腸黏膜屏障損傷的影響。
　　方法：把50只健

7、康雄性SD大鼠，隨機分成正常對照組和燒傷后12小時、24小時、36小時、48小時（T1-T4），每組各10只，用控時控溫控壓蒸汽燙傷儀在每只燙傷組大鼠背部造成全身體表面積為30%的III度燒傷，于各時相點頸椎脫臼處死SD大鼠，提取腸道淋巴細胞，運用流式細胞儀檢測Th17及Treg細胞的比例變化，提取腸黏膜組織上清液采用ELISA方法檢測IL-17A、IL-6的表達變化，取門靜脈血清采用ELISA方法檢測IL-17A、IL-6含量的表達變

8、化，同時取距回盲部7cm的一段小腸組織進行切片、HE染色，顯微鏡下觀察損傷程度，運用改良chiu評分法進行評分。
　　結果：
　?。?）嚴重燒傷后各個時相點，Th17細胞比例逐漸升高，與正常對照組(0.82±0.07)比較，T1組Th17比例(1.54±0.07)出現升高，T4組Th17比例(3.03±0.08)顯著升高，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.01）。
　?。?）嚴重燒傷后各個時相點，Treg細胞比例逐漸升高，與

9、正常對照組(8.07±0.82)比較，T1組Treg比例(17.42±1.17)出現升高，T4組Treg比例(40.66±0.93)顯著升高，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.01）。
　?。?）嚴重燒傷后各個時相點門靜脈血中IL-6、IL-17A均升高，與正常對照組IL-6(36.3±2.83)、IL-17A(16.3±1.25)比較，T1組IL-6(105.7±5.89)、IL-17A(31.3±4.77)含量均升高，48小時T4組

10、IL-6(263.9±5.30)、IL-17A(107±3.43)含量均顯著升高，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.01）。
　?。?）嚴重燒傷后各個時相點腸黏膜組織中IL-6、IL-17A均升高，與正常對照組IL-6(5.1±0.74)、IL-17A(18.1±1.60)比較，T1組IL-6(16.3±1.16)、IL-17A(29.2±2.49)含量均升高，T4組IL-6(53.4±2.99)、IL-17A(61.3±3.47)含量

11、均顯著升高，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.01）。
　?。?）與空白對照組（0）比較，各時相點腸黏膜損傷程度評分均升高，其中T1組為（2.7±0.67），T4組（6.8±0.63）腸黏膜損傷最重，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。
　?。?）將Th17、Treg、門靜脈血 IL-6、IL-17A，小腸組織IL-6、IL-17A表達與腸黏膜損傷評分呈正相關，r=0.972，0.969，0.973，0.962，0.970，0.96

12、1.P<0.01。Th17/Treg與腸黏膜損傷評分呈負相關，r=-0.814，P<0.01。將Th17、Treg、Th17/Treg、門靜脈血IL-6、IL-17A，小腸組織IL-6、IL-17A值作為自變量，腸黏膜損傷評分作為應變量進行多元線性回歸分析，顯示R=0.978；p<0.01。
　　結論：大鼠嚴重燒傷后腸道Th17/Treg細胞比例逐漸降低，腸黏膜組織及門靜脈血中IL-17A、IL-6逐漸升高，腸黏膜損傷加重，Th1