食管鱗癌中的改變及其作用研究.pdf

1、食管癌是人類常見惡性腫瘤之一,尋找與食管癌發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)的基因、并對(duì)之進(jìn)行功能研究,是當(dāng)前的主要研究方向之一。寡核苷酸微陣列比較基因組雜交(Oligo Array CGH)是近年來(lái)將傳統(tǒng)比較基因組雜交原理與微陣列技術(shù)相結(jié)合而產(chǎn)生的一項(xiàng)新技術(shù),可以在全基因組水平研究腫瘤細(xì)胞的拷貝數(shù)改變,有助于快速鑒定腫瘤中的變異基因。本研究應(yīng)用Oligo Array CGH研究食管癌的染色體改變,并從變異發(fā)生頻率較高的染色體區(qū)段尋找可能與食管癌發(fā)生發(fā)展

2、有關(guān)的基因。
　　 采用Agilent公司Human4×44K Oligo Array CGH芯片對(duì)15例Ⅱ期食管鱗癌組織標(biāo)本的染色體改變進(jìn)行了系統(tǒng)的分析,鑒定出一系列變異區(qū)段。其中高頻擴(kuò)增的染色體臂包括3q(81％)、8q(69％)、17q(44％)、19p(50％)、20q(63％)等；高頻缺失的染色體臂包括3p(63％)、4p(44％)、5q(44％)、9p(56％)、18q(75％)、19q(56％)、21q(44％)等

3、。擴(kuò)增頻率較高的染色體區(qū)段有3q26.2-3q27.3(81％)、8q24.13-8q24.2l(63％)、11q13.3(75％)等,缺失頻率較高的區(qū)段有3p14.2—3p21.1(63％)、3p21.31-3p25.2(63％)、11q21—11q23.3(69％)、9p21.3(56％)等。
　　 芯片結(jié)果顯示3q26.2-3q27.3是擴(kuò)增頻率最高的區(qū)段(81％)。Protein Kinase C iota(PKCiot

4、a)基因位于該區(qū)段的擴(kuò)增核心區(qū),也發(fā)生了顯著地?cái)U(kuò)增(11/15)。本組前期的熒光原位雜交結(jié)果提示,PKCiota基因在食管癌組織和多個(gè)食管癌細(xì)胞系中存在高頻率的擴(kuò)增,其編碼的蛋白也在食管癌組織中高表達(dá)。PKCiota基因編碼一種絲/蘇氨酸激酶,屬于PKC家族中的非典型性PKC(Atypical PKCs)亞型。其在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用所知甚少。鑒此我們?cè)谑彻馨┲袑?duì)其功能進(jìn)行了研究。在食管癌細(xì)胞系的體外實(shí)驗(yàn)中,PKCiota敲降不影響細(xì)胞

5、的增殖、平板集落形成、細(xì)胞周期進(jìn)展及細(xì)胞凋亡,但可抑制細(xì)胞運(yùn)動(dòng)、軟瓊脂集落形成和抗失巢凋亡能力。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)顯示,PKCiota表達(dá)降低可抑制裸鼠皮下瘤生長(zhǎng)。
　　 針對(duì)PKCiota影響食管癌細(xì)胞抗失巢凋亡能力這一現(xiàn)象,我們進(jìn)一步探討了其分子機(jī)制。發(fā)現(xiàn)PKCiota只影響AKT的活化,對(duì)ERK無(wú)影響,提示PKCiota的抗失巢凋亡作用與P13K-AKT通路有關(guān)。而且,我們發(fā)現(xiàn)PKCiota在懸浮狀態(tài)能夠調(diào)節(jié)另一抗失巢凋亡基因SKP

6、2的蛋白水平,提示其通過(guò)調(diào)節(jié)SKP2行使抗失巢凋亡的功能。免疫共沉淀結(jié)果顯示二者沒(méi)有相互作用,RT-PCR結(jié)果顯示懸浮狀態(tài)下PKCiota對(duì)SKP2的mRNA水平也沒(méi)有影響,表明PKCiota可能在轉(zhuǎn)錄后水平或通過(guò)其它基因間接對(duì)SKP2進(jìn)行調(diào)節(jié)。
　　 以上結(jié)果表明,Oligo Array CGH是一種研究腫瘤遺傳學(xué)的有效方法,能夠在全基因組水平鑒定腫瘤的DNA拷貝數(shù)改變,有助于發(fā)現(xiàn)腫瘤相關(guān)基因。染色體3q26上的PKCiota