AT1受體拮抗劑Candesartan對AngⅡ促原代AML細胞增殖的拮抗作用及機制.pdf

1、研究背景:
　　 不斷探討急性白血病新的發(fā)病機制并針對其機制進行個體化的靶向治療成為目前急性白血病基礎(chǔ)研究和臨床治療的熱點。近年研究發(fā)現(xiàn)腎素-血管緊張素系統(tǒng)與急性白血病的發(fā)生有關(guān)，Koca E[1]等報道白血病K562細胞株表達腎素、血管緊張素轉(zhuǎn)化酶、血管緊張素原及血管緊張素Ⅱ1型受體(AT1R)和血管緊張素Ⅱ2型受體(AT2R)。2007年Beyazit Y[2]等報道在急性髓系白血病(AML)患者骨髓中存在著腎素、血管緊張素

2、轉(zhuǎn)化酶及血管緊張素的過表達。Casares MT[3]等研究腎素與急性髓系白血病(AML)的相關(guān)性時發(fā)現(xiàn)，在腎素陽性表達的AML患者中，化療完全緩解(CR)時腎素表達消失，在復發(fā)時腎素再次表達;在化療不敏感腎素陽性表達的AML患者中腎素持續(xù)表達。以上研究均說明腎素-血管緊張素系統(tǒng)在急性白血病發(fā)病中可能起重要作用。
　　 進一步研究其機制發(fā)現(xiàn)血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)通過血管緊張素Ⅱ1型受體途徑促進白血病K562細胞株增殖及促進其自

3、分泌VEGF，上調(diào)腫瘤血管新生。有學者研究報道AngⅡ經(jīng)其AT1R促進胃癌MKN-28細胞株分泌基質(zhì)金屬蛋白酶-2(MMP-2)、基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)增加[4]，而基質(zhì)金屬蛋白酶降解基質(zhì)對血管生成、腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移至關(guān)重要[5]，有研究表明MMP-2、MMP-9表達程度的高低與腫瘤分級、分期相關(guān)[6]；Ishimatsu S[7]等研究發(fā)現(xiàn)AngⅡ激活AT1R后通過PI3K/AKT等信號途徑增強絨毛膜癌BeWo細胞株遷移和侵襲

4、。以上研究說明AngⅡ經(jīng)其AT1受體促進細胞因子分泌增加及調(diào)節(jié)各種信號傳導途徑來調(diào)控腫瘤細胞生長、侵襲；然而AngⅡ是否也通過激活AT1R后經(jīng)PI3K/AKT信號途徑的級聯(lián)反應促進白血病細胞的增殖，目前研究極少見。針對腎素-血管緊張素系統(tǒng)在急性白血病發(fā)病中起的作用，2009年De la Iglesia[8]報道使用血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑群多普利、AT1受體拮抗劑氯沙坦體外對白血病細胞株K562、HL60、U937、 KU812具有抑制細

5、胞增殖及促進其凋亡作用，并證實其抑制細胞增殖不依賴于C-myc、bcl-2基因表達的下降，其促細胞凋亡作用也不是通過下調(diào)C-myc、bcl-2、bcl-X基因表達來實現(xiàn)，其機制可能與這些藥物阻斷血管緊張素Ⅱ經(jīng)AT1受體激活Smad有關(guān);但AT1受體拮抗劑能否對原代AML細胞起作用仍少見報道。
　　 2009年Kosugi M[6,9，10]等報道在膀胱癌動物模型中顯示AT1受體拮抗劑聯(lián)合紫杉醇、順鉑具有協(xié)同抗腫瘤作用，AT1受體

6、拮抗劑聯(lián)合化療藥是否也能對原代AML細胞具有協(xié)同抑制增值作用的研究也少見。
　　 根據(jù)現(xiàn)有的研究基礎(chǔ)，因此本研究旨在探討AT1R受體拮抗劑Candesartan對AngⅡ促原代AML細胞增殖的拮抗作用及機制，進一步觀察聯(lián)合化療藥體外對白血病抑制增殖情況，為將來進一步可能的臨床聯(lián)合用藥提供依據(jù)。
　　 研究目的:
　　 本研究觀察AngⅡ?qū)υ毙运杓毎籽』颊甙籽〖毎鲋车挠绊懞脱芫o張素Ⅱ AT1受體拮抗劑

7、Candesartan能否阻斷這種作用，探討其機制，進一步觀察Candesartan聯(lián)合化療藥體外對AML細胞抑制增殖情況，為將來進一步可能的臨床聯(lián)合用藥提供依據(jù)。
　　 對象與方法:
　　 對象：32例除M3外成人急性髓細胞白血病(AML)患者骨髓標本來自2009年02月至2010年2月我院住院及門診初診AML患者，其中男性18例，女性14例，中位年齡43(11-82)歲。按FAB分型標準，其中M26例，M410例，M

8、515例，M61例，26例非惡性血液病患者正常骨髓像的骨髓為對照組，男性14例，女性12例。
　　 方法：MTT法分別觀察AngⅡ?qū)υ鶤ML細胞、正常骨髓單個核細胞增殖的影響；AT1R拮抗劑Candesartan、AT2R拮抗劑PD123319對AngⅡ促原代AML細胞增殖的拮抗作用；流式細胞儀測定細胞凋亡；Western-blot法檢測Candesartan、PI3K抑制劑LY294002對原代AML細胞AKT磷酸化的影響；

9、Elisa法檢測Candesartan及PI3K抑制劑LY294002處理前后培養(yǎng)上清液MMP-9水平變化；MTT法觀察Candesartan聯(lián)合柔紅霉素對原代AML細胞細胞增殖抑制率。
　　 結(jié)論:
　　 1.AngⅡ能劑量和時間依賴性促進原代AML細胞增殖，而對正常骨髓單個核細胞增殖無此作用。
　　 2.AT1受體拮抗劑Candesartan能劑量和時間依賴性抑制AngⅡ作用下原代AML細胞增殖，而AT2受體