microRNA-124a在大鼠損傷脊髓中的表達及與鈣蛋白酶1的相關分析.pdf

1、【目的】:
　　觀察并分析大鼠急性脊髓損傷后microRNA-124a(miRNA-124a)和鈣蛋白酶1(calpain1)基因表達變化及二者間的關系,為探尋脊髓損傷潛在的干預靶點提供實驗依據(jù)。
　　【方法】:
　　采用改良Allen,s法建立大鼠急性脊髓損傷模型;將108只大鼠隨機分為無脊髓損傷組(A組、對照組,18只)、脊髓損傷組(B組、實驗組、SCI組,包括SCI后6h、12h、24h、3d、7d組,每組18只

2、);各組分別于相應實相行BBB評分評價神經(jīng)功能、HE染色觀察組織形態(tài)學變化、實時熒光定量PCR及原位雜交檢測miRNA-124a和calpain1基因表達。
　　【結果】:
　　1、BBB評分:各損傷組較對照組BBB評分明顯降低,差異均有統(tǒng)計學意義。
　　2、HE染色:正常脊髓組織神經(jīng)元形態(tài)結構正常;損傷后6h脊髓組織出現(xiàn)廣泛水腫;12-24h后發(fā)展為壞死組織,急性炎性細胞浸潤播散到灰質;損傷后24h-7d,血管通透性

3、增加,神經(jīng)細胞廣泛溶解、壞死,并有大量炎癥細胞浸潤。
　　3、實時熒光定量PCR:各損傷組脊髓組織中miRNA-124a的表達均降低,與對照組比較,差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05);脊髓損傷后calpain1表達逐漸增高,24h時達到高峰,隨之下降,至3d時表達仍高于A組,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),7d時calpain1不表達或低表達,與對照組比較,差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。急性脊髓損傷后miRNA-124a、c

4、alpain1兩種基因的表達呈顯著負相關(r=-0.89)。
　　4、原位雜交:miRNA-124a、calpain1mRNA主要表達于大鼠脊髓腹角運動神經(jīng)元,二者的細胞內(nèi)定位為胞漿染色。miRNA-124a主要表達于對照組及脊髓損傷后7d組,而calpain1mRNA主要表達于脊髓損傷后6h、12h、24h、3d組。
　　【結論】:
　　脊髓損傷后miRNA-124a基因表達顯著降低,而calpain1的表達明顯上調