生黃合劑抗柯薩奇病毒性心肌炎的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、本文的研究目的：第一，以組織病理學(xué)改變?yōu)橹笜?biāo)，觀察柯薩奇B組病毒(CVB3)感染鼠的自然病程以及在此過(guò)程中IL-2、IL-10的變化情況，為研究藥效學(xué)奠定基礎(chǔ)。第二，應(yīng)用析因設(shè)計(jì)觀察生黃合劑抗柯薩奇B組病毒(CVB3)感染鼠心肌炎的藥效試驗(yàn)，初步探討生黃合劑對(duì)柯薩奇B組病毒(CVB3)心肌炎的治療效果，為進(jìn)行臨床試驗(yàn)及進(jìn)一步探討其作用機(jī)制提供依據(jù)。 研究方法：自然病程觀察：首先Hela細(xì)胞增殖、病毒擴(kuò)增、用微量法測(cè)定CVB3的半

2、數(shù)組織感染量(TCID50)。其次對(duì)小鼠VMC自然病程進(jìn)行觀察：將108只小鼠隨機(jī)分為2組，實(shí)驗(yàn)組80只，對(duì)照組28只。實(shí)驗(yàn)組小鼠每只腹腔注射1000TCID50/0.1ml的CVB30.1ml，對(duì)照組小鼠每只腹腔注射RPMI1640維持液0.1ml。觀察小鼠一般情況，于接種病毒后第2、4、7、9、10、14、18天各隨機(jī)抽取6只小鼠摘眼球取血，分離血清，用ABC-HRP夾心ELISA法測(cè)定血清中IL-2和IL-10的水平變化；并處死小

3、鼠，取心、肝、脾、腎等臟器，用10％的甲醛固定，石蠟包埋，HE染色，光鏡觀察各臟器的病理變化及計(jì)算心肌病理變化積分。 藥效實(shí)驗(yàn)：用17～19g的昆明種小鼠，除正常對(duì)照組外，每只小鼠腹腔接種1000TCID50/0.1ml的CVB30.1ml，建立VMC感染模型。生脈飲組(生脈飲生藥2g/kg)、1：1液組(生脈飲2g/kg、黃芩莖葉1.8g/kg)及1：2液組(生脈飲2g/kg、黃芩莖葉3.6g/kg)小鼠均灌胃給藥，0.2ml

4、/10g，陽(yáng)性藥物對(duì)照組(利巴韋林80mg/kg)小鼠腹腔注射0.1ml/10g，病毒對(duì)照組小鼠用0.9％生理鹽水0.2ml/10g灌胃，均每日兩次，連續(xù)10天。于感染后7、14天各組隨機(jī)抽取6只小鼠，摘眼球取血并分離血清，測(cè)定血清中IL-2和IL-10的水平變化；并處死小鼠，取心、肝、脾、腎等臟器，用10％的甲醛固定，光鏡觀察各臟器的病理變化及計(jì)算心肌病理變化積分。 研究結(jié)果：CVB3在Hela細(xì)胞上傳代，測(cè)得CVB3的TCI

5、D50為10-5.5/0.1ml。自然病程觀察：接種CVB3后導(dǎo)致心肌炎小鼠的多臟器損害，解剖發(fā)現(xiàn)部分小鼠心外膜可見(jiàn)黃白色斑點(diǎn)及心外膜下淤血，大部分自然死亡鼠的肝臟明顯腫大，可見(jiàn)片狀灰白色區(qū)域。光鏡觀察在接種CVB3后第2天小鼠的肝臟、脾臟開(kāi)始出現(xiàn)病變，肝細(xì)胞呈水樣變性及點(diǎn)狀壞死，脾淋巴小結(jié)增生，數(shù)量增多，脾動(dòng)脈周?chē)馨颓试龊?；接種后第4-7天小鼠的肝臟病變嚴(yán)重，可見(jiàn)肝細(xì)胞呈大片狀壞死，心臟出現(xiàn)輕微改變，可見(jiàn)心肌細(xì)胞溶解，胞漿凝聚，橫紋

6、消失，并偶見(jiàn)點(diǎn)狀壞死灶。第9-14天心肌病變嚴(yán)重，可見(jiàn)條索狀、大面積壞死灶，伴有大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。第18天后心肌炎癥浸潤(rùn)逐漸消退，心肌輕度纖維化。在整個(gè)病程中，肝脂肪變性明顯，可見(jiàn)彌漫性肝血管內(nèi)皮細(xì)胞增生，肝細(xì)胞呈點(diǎn)狀或片狀壞死，腎臟始終病變不明顯，僅見(jiàn)部分小鼠腎間質(zhì)充血，腎小管上皮細(xì)胞水腫。小鼠血清IL-2及IL-10的變化：接種CVB3后第4天血清IL-2水平低于正常組(P＜0.05)，第9、10、14天IL-2水平高于正常組(P＜

7、0.01)，且血清IL-2水平與心肌病理積分關(guān)系密切；血清IL-10在接種病毒后逐漸下降，第9、10、14天明顯低于正常組(P＜0.05)。 藥效觀察：各治療組小鼠的一般情況好于病毒對(duì)照組，明顯延遲感染鼠的死亡時(shí)間及減輕各臟器的病理?yè)p害程度。用析因方差分析對(duì)不同時(shí)間各組小鼠的心肌病理積分、血清IL-2及IL-10的水平分別進(jìn)行比較(P＜0.005)，時(shí)間與分組之間均存在交互作用，然后分析不同時(shí)間的單獨(dú)效應(yīng)。接毒后第7天各組小鼠的

8、心肌病理積分比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)，而血清中IL-2、IL-10水平比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05，P＜0.005)。第14天各試驗(yàn)組間心肌病理積分比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＜0.005)，1:1液組小鼠心肌病變較輕，即生脈飲與黃芩莖葉總黃酮按1:1配方對(duì)感染鼠的保護(hù)和治療效果要好于1:2配方及生脈飲單獨(dú)使用，且優(yōu)于利巴韋林的效果。第14天各試驗(yàn)組小鼠血清IL-2、IL-10的水平比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.01)，1：1液組小鼠

9、血清IL-2水平明顯低于其它各組，IL-10的水平明顯高于其它試驗(yàn)組。 研究結(jié)論：(1)CVB3感染昆明種小鼠可引起病毒性心肌炎，且伴有多臟器損害，對(duì)多臟器進(jìn)行病理學(xué)檢查是病毒性心肌炎的組織病理學(xué)診斷的有效方法之一。(2)細(xì)胞因子IL-2及IL-10在病毒性心肌炎發(fā)病中起不同作用。(3)細(xì)胞因子IL-2與心肌病理積分關(guān)系密切。(4)在病毒血癥期(接毒第4-7天)死亡的小鼠可能死于肝衰竭。(5)生脈飲與黃芩莖葉總黃酮通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞因