替莫唑胺腦靶向藥物組合在膠質(zhì)瘤模型中的應(yīng)用.pdf

1、第一部分 Wistar大鼠C6膠質(zhì)瘤模型的建立
　　目的:通過立體定位技術(shù)建立大鼠 C6膠質(zhì)瘤模型。觀察大鼠成瘤后的生長狀態(tài)、生存期、病理變化等。確立大鼠腦膠質(zhì)瘤模型建立的有效方法,提高成瘤率,為進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)研究提供基礎(chǔ)。
　　材料和方法:雄性Wistar大鼠135只,體重200-300g,應(yīng)用大鼠立體定位儀,將大鼠 C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)后接種于鼠腦右側(cè)尾狀核頭,接種細(xì)胞量為1-2×106/10μl/只。接種第5天進(jìn)行

2、磁共振掃描檢測(cè)成瘤率。
　　結(jié)果:接種中意外死亡5只,接種后第1、2天意外死亡8只,98只大鼠磁共振掃描可見腫瘤生長,存活大鼠成瘤率為80.3％。各組大鼠接種后皮毛失去光澤,活動(dòng)量減少,食物和水的攝入減少,并有腹瀉等癥狀;接種2周后部分大鼠開始出現(xiàn)體重減輕,偏癱,鼻出血、眼周淤血等癥狀;第3周后癥狀明顯加重,開始出現(xiàn)據(jù)食水等現(xiàn)象,接種后第2周末開始發(fā)生死亡,至第60天全部死亡。
　　結(jié)論:C6膠質(zhì)瘤模型的建立方法基本上比較成

3、熟,成瘤率較高,可以滿足大規(guī)模的實(shí)驗(yàn)研究。為盡可能的提高成瘤率,細(xì)胞株選擇和培養(yǎng)是關(guān)鍵。原代的膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞,可以較好的保證細(xì)胞的抗原性。細(xì)胞培養(yǎng)方面,要選用對(duì)數(shù)生長期的細(xì)胞進(jìn)行種植,細(xì)胞生長活躍,更利于膠質(zhì)瘤模型的建立。動(dòng)物麻醉掌握好劑量,避免麻醉過量引起動(dòng)物死亡。接種腫瘤細(xì)胞要嚴(yán)格無菌操作,避免移植感染。
　　第二部分替莫唑胺腦靶向藥物組合在大鼠膠質(zhì)瘤模型中的療效評(píng)價(jià)
　　目的:制備替莫唑胺(temozolomide,

4、TMZ)腦靶向藥物組合,并通過MRI、生存期觀察和病理學(xué)改變初步評(píng)價(jià)其在大鼠C6膠質(zhì)瘤模型的治療效果。
　　材料和方法:隨機(jī)選取術(shù)后第5天經(jīng)MR檢測(cè)確認(rèn)的成瘤大鼠72只,隨機(jī)分為6組,1-6分別為:空白組、靜脈注射TMZ組、口服TMZ組和經(jīng)鼻腔腦靶向藥組低、中、高劑量組,每組12只。分別用生理鹽水、TMZ靜脈注射、灌胃以及腦靶向藥物組合低、中、高劑量對(duì)大鼠C6膠質(zhì)瘤模型治療后, MR檢查大鼠的腫瘤體積變化,觀察大鼠生存期和病理學(xué)的

5、改變。
　　結(jié)果:Wistar大鼠均得到了清晰的MRI影像。1-6組各組在治療前后的體積增長值分別為66.25±9.18 mm3,35.08±4.16 mm3,37.17±5.36 mm3,11.17±1.28 mm3,18.0±2.39 mm3,and11.33±2.49 mm3,各組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,各組TMZ治療均有效(P=0.001),靜脈注射和口服TMZ組未見明顯差異(p=0.861),各劑量TMZ腦靶向藥物組合無明顯

6、差異(p=0.067),低劑量TMZ腦靶向藥物組合治療后腫瘤體積增長明顯低于靜脈注射TMZ組(P=0.034)和口服TMZ組(P=0.035),提示腦靶向藥物組合能抑制腫瘤的生長。1-6組的中位生存期分別為21.5 d,18.5 d,21.5 d,37.5 d,45.5 d,和30.0 d,3組腦靶向藥物組合的生存期無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.642),但明顯較其他三組延長(以低劑量組為例, P=0.001, P=0.02, P=0.02)。

7、HE染色證實(shí)各組大鼠均接種了膠質(zhì)瘤,TMZ腦靶向藥組較其他各組PCNA表達(dá)減少,TUNEL凋亡增加。
　　結(jié)論:TMZ腦靶向藥物組合能抑制膠質(zhì)瘤腫瘤細(xì)胞的生長,延長動(dòng)物的生存期,或許可以作為治療膠質(zhì)瘤新的有效劑型, TMZ腦靶向藥物組合的研究對(duì)于人類腦膠質(zhì)瘤的治療有良好前景。
　　第三部分定量磁共振動(dòng)態(tài)增強(qiáng)掃描對(duì)替莫唑胺腦靶向藥物組合治療大鼠膠質(zhì)瘤的初步評(píng)價(jià)
　　目的:通過大鼠C6腦膠質(zhì)瘤模型經(jīng)TMZ腦靶向藥物組合治療

8、前后對(duì)照,探討腦膠質(zhì)瘤磁共振灌注成像的動(dòng)態(tài)量化研究的可行性及價(jià)值。并進(jìn)一步證實(shí)TMZ腦靶向藥物組合的治療效果。
　　材料和方法:隨機(jī)選取10只大鼠建立膠質(zhì)瘤大鼠模型,術(shù)后第5天進(jìn)行磁共振掃描,序列包括T1map和T1動(dòng)態(tài)增強(qiáng)掃描。發(fā)現(xiàn)一只大鼠未成瘤。結(jié)束后從其余大鼠中隨機(jī)選取兩只處死、取腦并固定。術(shù)后第6天經(jīng)鼻腔給予TMZ腦靶向藥物組合治療,給藥劑量為4mg/kg/d,連續(xù)5天。術(shù)后第11天重復(fù)進(jìn)行磁共振動(dòng)態(tài)增強(qiáng)掃描后隨機(jī)處死治療

9、后的大鼠2只并取腦固定。Image J后處理軟件處理圖像數(shù)據(jù)資料,得到Ktrans偽彩圖和FV偽彩圖,計(jì)算腫瘤Ktrans值和Vp值,并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。治療前后各2只大鼠標(biāo)本進(jìn)行 HE染色和VEGF免疫組化。
　　結(jié)果:計(jì)算出治療前后的ktrans值均數(shù)分別為0.103±0.058/min,0.042±0.031/min。利用配對(duì)t檢驗(yàn),證明治療前后ktrans值的差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.027)。Vp值均數(shù)分別為0.210±0

10、.126/min,0.136±0.058/min,治療前后 Vp值的差異無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p=0.117)。HE染色顯示治療后細(xì)胞密度減低,VEGF染色治療組腫瘤細(xì)胞胞漿陽性率小于非治療組。
　　結(jié)論: TMZ腦靶向藥物抑制腫瘤血管生成,其治療以后 ktrans值減小,二者改變相符,說明ktrans值能在一定程度上反應(yīng)腫瘤血管的通透性,腦膠質(zhì)瘤磁共振灌注成像的動(dòng)態(tài)量化研究是可行的。病理、免疫組化及ktrans值都進(jìn)一步證實(shí)了TMZ