白細(xì)胞介素-18與2型糖尿病發(fā)病關(guān)系的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：本研究采用長(zhǎng)期高脂飼養(yǎng)結(jié)合小劑量鏈脲佐菌素(streptozotocin，STZ)一次注射誘導(dǎo)正常SD(Sprague-Dawley)大鼠發(fā)生2型糖尿病(T2DM)，制造一種符合人類T2DM發(fā)病特點(diǎn)的動(dòng)物模型，并用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)法檢測(cè)各組大鼠血清白細(xì)胞介素-18(IL-18)、IL-6、腫瘤壞死因子-a(TNF-a)水平，速率散射比濁法檢測(cè)各組大鼠血清C反應(yīng)蛋白(CRP)水平，同時(shí)檢測(cè)各組大鼠血糖、血脂、胰島素等代

2、謝相關(guān)指標(biāo)，分析T2DM不同病程中IL-18、IL-6、TNF-a、CRP的水平及其與胰島素抵抗的相關(guān)性，探討IL-18等炎癥因子與T2DM發(fā)病的關(guān)系，進(jìn)一步證實(shí)慢性炎癥在T2DM發(fā)生發(fā)展中起重要的作用。 方法：健康清潔級(jí)近交系SD雄性大鼠40只，體重190-240g，大鼠在適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，按完全隨機(jī)法分為2組，正常對(duì)照組(NC)18只，用普通飼料喂養(yǎng)；高脂喂養(yǎng)+小劑量STZ注射組(HFS)22只，用高脂飼料喂養(yǎng)。第8周末所有

3、大鼠禁食12小時(shí)后，HFS組按25mg/kg腹腔注射無(wú)菌STZ溶液，NC組腹腔注射相應(yīng)體積的無(wú)菌檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液(pH4.4)。第10周末，以口服葡萄糖耐量試驗(yàn)(OGTT)顯示血糖峰值≥16.7mmol/l或者糖負(fù)荷后2小時(shí)血糖(2hPG)≥11.1mmol/l作為糖尿病大鼠成模標(biāo)準(zhǔn)，篩選糖尿病大鼠。第14周末，隨機(jī)將2組大鼠各處死一半；剩余大鼠繼續(xù)喂養(yǎng)到第20周末后處死。大鼠處死時(shí)立即取出血清、胰腺組織和內(nèi)臟脂肪組織。用電子天平

4、稱內(nèi)臟脂肪重量(IAM)；用光鏡觀察HE染色胰腺組織；用ELISA法檢測(cè)大鼠血清IL-18、IL-6、TNF-a水平，速率散射比濁法檢測(cè)大鼠血清CRP水平，葡萄糖氧化酶法測(cè)定大鼠血清空腹血糖(FBG)水平，放射免疫法檢測(cè)大鼠血清空腹胰島素(FINS)水平，銅試劑法測(cè)定大鼠血清游離脂肪酸(FFA)水平，酶法測(cè)定大鼠血清甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)水平。 結(jié)果

5、：1.HFS組大鼠注射小劑量STZ后出現(xiàn)多飲、多尿等癥狀，OGTT結(jié)果顯示其血糖水平在0h、0.5h、1h、2h四個(gè)時(shí)點(diǎn)均高于NC組大鼠(P＜0.01)，且達(dá)到成模標(biāo)準(zhǔn)，但NC組大鼠在四個(gè)時(shí)點(diǎn)血糖均未達(dá)到成模標(biāo)準(zhǔn)。 2.HFS組大鼠經(jīng)高脂喂養(yǎng)后體重增幅大，第14周末其體重明顯高于NC組大鼠(P＜0.01)，但隨后體重逐漸降低，到第20周末與NC組大鼠比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。無(wú)論在第14周末還是在第20周末，HFS組大鼠IAM及血清

6、FBG、FFA、TG、TC、LDL-C水平均明顯高于相同周數(shù)NC組大鼠(P＜0.01)，但其血清HDL-C及胰島素敏感指數(shù)(ISI)顯著低于NC組大鼠(P＜0.01)。第14周末HFS組大鼠血清FINS水平明顯高于NC組大鼠(P＜0.01)，但第20周末兩組大鼠比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 3.HFS組大鼠胰腺HE染色結(jié)果：第14周末，胰島體積變小，結(jié)構(gòu)不清，胰島數(shù)目減少，胰島細(xì)胞數(shù)量減少，部分胰島細(xì)胞呈空泡狀，胰腺外分泌腺結(jié)構(gòu)正常。

7、以上變化在第20周末更明顯。 4.第14和20周末，HFS組大鼠血清IL-18、IL-6、TNF-a和CRP水平均顯著高于相同周數(shù)NC組大鼠(P＜0.01)。第20周末HFS組大鼠血清IL-18、IL-6、TNF-a和CRP水平高于第14周末，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。 5.Pearson直線相關(guān)分析顯示，第14和20周末，HFS組大鼠血清IL-6、TNF-a、CRP水平分別與ISI呈負(fù)相關(guān)(P＜0.01或P＜

8、0.05)。 6.Pearson直線相關(guān)分析顯示，第14和20周末，HFS組大鼠血清IL-18水平分別與體重、IAM、TG、TC、FFA、FBG、FINS、IL-6、TNF-a和CRP呈正相關(guān)性，與ISI呈負(fù)相關(guān)，與HDL-C、LDL-C無(wú)相關(guān)性。 結(jié)論：1.通過(guò)高脂喂養(yǎng)加小劑量STZ一次注射能夠在沒有糖尿病遺傳背景的正常SD大鼠中復(fù)制出符合人類T2DM發(fā)病特點(diǎn)的動(dòng)物模型。 2.HFS組大鼠血清IL-18、IL-