草酸-s-西酞普蘭對(duì)抑郁癥治療作用機(jī)制研究.pdf

1、目的：建立大鼠慢性輕度不可預(yù)見性應(yīng)激加孤養(yǎng)所致慢性應(yīng)激抑郁模型以及皮質(zhì)酮誘導(dǎo)PC12細(xì)胞模擬抑郁癥時(shí)神經(jīng)元損傷的細(xì)胞模型，探討草酸-s-西酞普蘭(Escitalopram，ESC)對(duì)抑郁癥治療作用機(jī)制。 方法：(1)建立慢性輕度不可預(yù)見性應(yīng)激加孤養(yǎng)所致慢性應(yīng)激抑郁模型，將大鼠篩選后隨機(jī)分為模型組、空白對(duì)照組及Escitalopram低、中、高劑量組。造模方法要點(diǎn)如下：將禁水(24h)、夾尾(1min)、45℃環(huán)境(5min)、4

2、℃冰水游泳(5min)、晝夜顛倒(24h)、禁食(24h)、電擊足底(電壓50mv，每隔50s刺激1次，每次持續(xù)10s，30次)、居住環(huán)境改變(潮濕墊料、鼠籠傾斜)及限制行為(2h)等刺激隨機(jī)安排到18天內(nèi)，模型組及Escitalopram各組均單獨(dú)飼養(yǎng)。在每天實(shí)驗(yàn)前半小時(shí)予大鼠灌胃，Escitalopram低劑量、中劑量和高劑量組分別給予灌胃Escitalopram1mg/kg，2mg/kg及4mg/kkg，模型組和空白對(duì)照組給予0.

3、9％生理鹽水灌胃，21天后，測(cè)定大鼠敞箱實(shí)驗(yàn)和液體消耗實(shí)驗(yàn)等行為學(xué)指標(biāo)變化及測(cè)定血漿皮質(zhì)醇(cortiso，CORT)和促腎上腺皮質(zhì)激素(adrenocorticotropichormone，ACTH)含量。(2)用免疫組化法分別檢測(cè)模型組，空白對(duì)照組，Escitalopram各組大鼠磷酸化cAMP反應(yīng)元件結(jié)合蛋白(cAMPresponseelementbindingprotein，CREB)和腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(Brain-deriv

4、edneurotrophicfactor，BDNF)的表達(dá)。(3)建立皮質(zhì)酮誘導(dǎo)PC12細(xì)胞模擬抑郁癥的腦神經(jīng)元損傷狀態(tài)細(xì)胞模型，分別給予低、中、高劑量Escitalopram(ESC6.25μmol·L-1，ESC12.5μmol·L-1，ESC25μmol·L-1)后，用MTT法檢測(cè)細(xì)胞的存活率。 結(jié)果：(1)慢性輕度不可預(yù)見性應(yīng)激加孤養(yǎng)模型所造成的慢性應(yīng)激抑郁模型大鼠水平運(yùn)動(dòng)得分(11.00±9.445)有所降低，與空白對(duì)

5、照組(82.50±5.822)相比，P＜0.01，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；垂直運(yùn)動(dòng)得分(1.83±1.835)有所降低，與空白對(duì)照組(12.67±3.445)相比，P＜0.01，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；理毛次數(shù)(1.17±0.983)有所降低，與空白對(duì)照組(3.00±0.894)相比，P＜0.05，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；中央格停留時(shí)間(3.33±1.033)有所升高，與空白對(duì)照(1.17±0.408)比，P＜0.05，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；糖水偏愛

6、度(47.83±6.338)有所降低，與空白對(duì)照組(86.50±3.782)相比，P＜0.01，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；模型組大鼠血漿的CORT(3.570±1.253)有所升高，與空白對(duì)照組(1.343±0.824)相比，P＜0.01，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；模型組大鼠血漿的ACTH(55.312±4.665)有所升高，與空白對(duì)照組(34.430±3.813)相比，P＜0.01，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Escitalopram低、中、高劑量組均能

7、改善大鼠的行為學(xué)，使Escitalopram低、中、高劑量組大鼠水平運(yùn)動(dòng)得分有不同程度提高(72.17±19.692，66.33±13.486，73.00±20.572)，與模型組相比，P＜0.01，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；Escitalopram低、中、高劑量組大鼠垂直運(yùn)動(dòng)得分分別為8.50±2.07、11.00±3.85、14.33±3.14，與模型組相比，P＜0.01，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；Escitalopram低、中、高劑量組大鼠理

8、毛次數(shù)(2.50±1.871、2.67±2.160、3.33±1.033)都有所增長(zhǎng)，Escitalopram高劑量組與模型組相比，P＜0.05，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；Escitalopram低、中、高劑量組中央格停留時(shí)間分別為1.33±0.516、1.33±0.522和1.17±0.408，與模型組相比有所減少，P＜0.01，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;Escitalopram低、中、高劑量組大鼠糖水偏愛度有所上升(83.33±8.618、86

9、.50±8.803、76.17±14.580)，與模型組相比，P＜0.01，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在大鼠血漿中，Escitalopram低、中、高劑量組CORT有所降低(2.457±1.105、2.190±1.594、1.282±0.516)，Escitalopram中劑量組與模型組相比，P＜0.05，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；Escitalopram高劑量組和與模型組相比，P＜0.01，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；Escitalopram各組大鼠血漿

10、中ACTH有所降低(49.737±4.911、36.223±10.878、35.345±13.047)，Escitalopram中、高劑量組與模型組相比，P＜0.01，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(2)免疫組化結(jié)果顯示空白對(duì)照組大鼠海馬區(qū)磷酸化CREB和BDNF陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)較多，模型組大鼠海馬區(qū)磷酸化CREB和BDNF表達(dá)明顯減少，而給予不同劑量Escitalopram后，其Escitalopram低、中、高劑量組陽(yáng)性細(xì)胞均有不同程度的上升。(

11、3)采用MTT法測(cè)定，皮質(zhì)酮(0.2mmol.L-。)誘導(dǎo)PC12細(xì)胞48小時(shí)后，模型組PC12細(xì)胞存活率明顯下降(0.557±0.044)，而分別給予Escitalopram低、中、高劑量(ESC6.25μmol·L-1，ESC12.5μmol·L-1，ESC25μmol·L4)后，Escitalopram低、中、高劑量組細(xì)胞存活率與模型組相比，均有不同程度的增高，其數(shù)值分別為0.747±0.195、0.994±0.108和1.091

12、40.101，Escitalopram低劑量組與模型組相比，P＜0.05，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；Escitalopram中、高劑量組與模型組相比，P＜0.01，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論：(1)慢性輕度不可預(yù)見性應(yīng)激加孤養(yǎng)可使大鼠行為學(xué)及神經(jīng)內(nèi)分泌發(fā)生異常改變，引起抑郁狀態(tài)，行為學(xué)及血漿中皮質(zhì)醇和促。腎上腺皮質(zhì)素均會(huì)發(fā)生改變。Escitalopram可以改善慢性應(yīng)激抑郁模型動(dòng)物的行為學(xué)，使得體內(nèi)血漿CORT和ACTH含量恢復(fù)正常，

13、提示其作用機(jī)制之一可能與作用于海馬，阻斷應(yīng)激對(duì)下丘腦-垂體-腎上腺軸的刺激作用及維持下丘腦-垂體-腎上腺軸的穩(wěn)定有關(guān)。(2)抑郁癥能夠引起神經(jīng)元的死亡，而研究表明，cAMP-CREB通路的激活介導(dǎo)BDNF表達(dá)并促進(jìn)神經(jīng)元再生，通過免疫組化的方法來檢測(cè)大鼠海馬中磷酸化CREB和BDNF的表達(dá)，Escitalopram很可能通過此途徑來使得BDNF高表達(dá)，從而起到神經(jīng)元再生來達(dá)到治療抑郁癥的作用。(3)離體實(shí)驗(yàn)采用皮質(zhì)酮誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞模