產(chǎn)聚γ-谷氨酸菌株的篩選.pdf

1、聚γ-谷氨酸(Poly-γ-glutamieacid；γ-PGA)是微生物產(chǎn)生的一種胞外氨基酸聚合物，由L-谷氨酸(L-Glu)、D-谷氨酸(D-Glu)通過γ-酰胺鍵結(jié)合形成。聚γ-谷氨酸具有生物相容性、生物可降解性、可食用且對人體和環(huán)境無毒害等優(yōu)點。可作為生物絮凝劑、增稠劑、加濕劑、藥物載體、藥物緩釋劑、生物可降解纖維、高吸水性樹脂、重金屬吸收劑以及食品添加劑等廣泛應(yīng)用于食品工業(yè)、藥物工業(yè)、化妝品工業(yè)及污水處理中，是一種應(yīng)用前景非常

2、廣闊的新型生物制品。本課題對γ-PGA產(chǎn)生菌的篩選和鑒定、發(fā)酵條件的優(yōu)化以及γ-PGA提取純化和表征進行了研究。主要研究結(jié)果如下： 以表觀粘度作為篩選指標，從一豆瓣醬樣品中分離篩選到一株產(chǎn)γ-PGA的菌株L536，其發(fā)酵液的粘度可達0.41帕·秒。發(fā)酵產(chǎn)物經(jīng)紙層析、氨基酸分析等鑒定，表明由單一谷氨酸聚合而成。依據(jù)菌落形態(tài)、菌體形態(tài)、生理生化特征以及16SrDNA基因序列分析的結(jié)果，菌株L536初步鑒定為解淀粉芽孢桿菌。國內(nèi)還未見

3、有解淀粉芽孢桿菌產(chǎn)γ-PGA的報道。 采用單因素試驗和正交試驗對菌株L536產(chǎn)γ-PGA的發(fā)酵培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件進行了優(yōu)化，確定了最佳發(fā)酵培養(yǎng)基組成為(g/L)：檸檬酸鈉18，谷氨酸鈉40，豆粕粉40，氯化鈉15，氯化銨7，MgSO4·7H2O0.9，K2HPO40.5，MnSO4·H2O0.2，Cacl2·2H2O0.2；確定了較優(yōu)培養(yǎng)條件為：初始值pH7.0，培養(yǎng)溫度37℃，搖瓶裝液量35mL/250mL三角瓶，搖床轉(zhuǎn)速200

4、r/min，接種量3％(V/V)，發(fā)酵時間47h。菌株L536在最佳培養(yǎng)基和較優(yōu)培養(yǎng)條件下培養(yǎng)，發(fā)酵液的表觀粘度達到1.6帕·秒，與優(yōu)化前相比較，粘度提高了3倍多，γ-PGA的產(chǎn)量從15g/L提高到22.57g/L。 初步研究了γ-PGA的分離純化過程，確定了分離純化的路線。通過離心除菌體、兩次乙醇沉淀、透析除鹽、冷凍干燥得到純化樣品，經(jīng)分析其純度可達93％。 采用紙層析、紫外掃描和紅外光譜等方法對純化的γ-PGA樣品進