D-aminoacylase的分離純化和特性研究.pdf

1、為了獲得能用于D-氨基酸工業(yè)化生產(chǎn)的D-氨基酰化酶(D-aminoacylase DAA)，我們擬從Microbacterium natoriense菌屬中分離出DAA，并對(duì)其特性進(jìn)行了分析。通過多步層析分離技術(shù)從TNJL143-2菌株中純化了DAA，應(yīng)用SDS-PAGE和層析分離技術(shù)分析了DAA的純度、分子量大小和聚體數(shù)；利用酶促反應(yīng)與TLC(薄層層析)及DAO(D-氨基酸氧化酶)技術(shù)檢測(cè)了DAA的催化底物的特異性、最適酶促反應(yīng)溫度和

2、pH值、以及耐受熱、酸、堿、高濃度底物以及金屬離子和EDTA的能力；通過蛋白質(zhì)序列分析儀分析了DAA的氨基酸序列；應(yīng)用巢式PCR技術(shù)從菌體DNA中釣取了目的基因，并推定了蛋白開放閱讀框架(ORF)；對(duì)比了TNJL143-2菌株DAA與其它菌株DAA的同源性。結(jié)果顯示獲得的DAA為單聚體，其分子量為56kDa，對(duì)于N-乙酰-D-氨基酸底物具有高活性。催化反應(yīng)的相對(duì)活性為46.4 U/mg、最適pH值為7.0、最適溫度為50℃、以及在上述條

3、件下反應(yīng)1小時(shí)后仍具有85％殘存酶活性。相對(duì)耐受Ca2+、Mn2+、Co2+和Cd2+和EDTA。該DAA的氨基酸序列與來自Alcaligenes xylosoxydans A-6、Alcalygenesfacelis DA1和paradoxus Iso1的DAA分別具有為25％、24％和26％的同源性。表明從Microbacterium natoriense TNJL143-2菌株中分離的DAA具有獨(dú)特的結(jié)構(gòu)和功能特性，以及潛在的應(yīng)用