抗子宮內(nèi)膜抗體對大鼠妊娠及其結(jié)局的影響的研究.pdf

1、目的：研究抗子宮內(nèi)膜抗體 (Antiendometrial antibody，EMAb)對大鼠妊娠及其結(jié)局的影響，探討不孕及自然流產(chǎn)的發(fā)病原因及發(fā)病機(jī)理，為臨床治療提供指導(dǎo)，并為免疫性避孕提供線索。 方法：將68只大鼠隨機(jī)分為三組：A組、實(shí)驗(yàn)組低劑量組(n=24)：大鼠腹腔內(nèi)緩慢注射純化人子宮內(nèi)膜抗原(Endometrial antigen，EMAg)90μg/kg，一月后同等劑量加強(qiáng)一次；B組、實(shí)驗(yàn)組高劑量組(n=24)：大鼠

2、腹腔內(nèi)緩慢注射純化人子宮內(nèi)膜抗原180μg/kg，一月后同等劑量加強(qiáng)一次；C組、對照組(n=20)：在相同時間大鼠腹腔內(nèi)緩慢注射生理鹽水1ml。每組分別于第一次注射EMAg后第6周和第8周末經(jīng)頸靜脈竇取血2ml并分離血清，用間接ELISA法定性測定抗子宮內(nèi)膜抗體(EMAb)，用電化學(xué)發(fā)光法(electrochemiluminescence，ECL)定量測定CA-125。第8周檢測EMAb后，各組隨機(jī)選取EMAb陽性的大鼠2只，剪開腹壁，

3、摘取子宮并保存。此后，將各組剩余雌鼠與雄鼠以3：1的比例混養(yǎng)一周以交配妊娠。一周后將雌雄大鼠分籠，并將未孕雌鼠麻醉后剖腹摘取子宮并保存，已孕雌鼠于妊娠期間觀察孕鼠有無流產(chǎn)跡象，并于妊娠21天后麻醉剖腹取胎并計數(shù)，然后摘取子宮，記錄仔鼠數(shù)量、體重、身長和胎盤重量、直徑，并于每只已孕雌鼠中隨機(jī)留取2個胎盤。摘取的子宮和胎盤均置于4﹪的甲醛溶液中固定，并制成HE染色切片行病理組織學(xué)檢查，觀察其組織結(jié)構(gòu)。采用SPSS13.0統(tǒng)計學(xué)軟件系統(tǒng)做統(tǒng)計

4、分析，EMAb陽性率、不孕率、流產(chǎn)率和畸形率以百分?jǐn)?shù)表示，CA-125水平、孕鼠所產(chǎn)仔鼠數(shù)、仔鼠的體重和身長、胎盤的重量和直徑以均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，多個樣本均數(shù)兩兩比較方差分析采用Newman-Keuls法。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)果：1．EMAb陽性率：注射EMAg第6周末，各組EMAb陽性率分別為實(shí)驗(yàn)組低劑量組(A組)16.67﹪(4/24)，實(shí)驗(yàn)組高劑量組(B組)20.83﹪(5/24)，對照組(C組)

5、0﹪(0/20)。另外實(shí)驗(yàn)組合并后即A+B組為18.75﹪(9/48)。各組之間無顯著差異(P>0.05)。注射EMAg第8周末，各組EMAb陽性率分別為實(shí)驗(yàn)組低劑量組(A組)20.83﹪(5/24)，實(shí)驗(yàn)組高劑量組(B組)29.17﹪(7/24)，對照組(C組)為0﹪(0/20)。實(shí)驗(yàn)組合并后即A+B組為25.00﹪(12/48)。B組與C組、A+B組與C組之間均有顯著差異(P<0.05)，A組與B組、A組與C組、之間無顯著差異(P>

6、0.05)。 2．CA-125水平：注射EMAg后第6周末，各組CA-125水平分別為實(shí)驗(yàn)組低劑量組(A組)25,58±0.06U/ml，實(shí)驗(yàn)組高劑量組(B組)25.56±0.07U/ml，試驗(yàn)組合并后即A+B組25.57±0.08U/ml，對照組(C組)25.55±0.10U／ml。各組之間無顯著差異(P>0.05)。 注射EMAg后第8周末，各組CA-125水平分別為實(shí)驗(yàn)組低劑量組(A組)25.56±0.05U/ml

7、，實(shí)驗(yàn)組高劑量組(B組)25.57±0.04U/ml，試驗(yàn)組合并后即A+B組25.56±0.03U/ml，對照組(C組)25.56±0.04U/ml。各組之間無顯著差異(P>0.05)。 3．不孕率：雌雄大鼠混養(yǎng)一周后，各組不孕率分別為實(shí)驗(yàn)組低劑量組(A組)40.91﹪(9/22)，實(shí)驗(yàn)組高劑量組(B組)59.09﹪(13/22)，A組與B組中所有EMAb陽性者組[命名為E(+)組]62.50﹪(5/8)，A組與B組中所有EMA

8、b陰性者組[命名為E(-)組]47.22﹪(17/36)，對照組(C組)15.00﹪(3/20)。B組與C組之間有極顯著差異(P<0.01)，E(+)組與C組、E(-)組與C組之間有顯著差異(P<0.05)，A組與B組、A組與C組、E(+)組與E(-)組之間無顯著差異(P>0.05)。 4．流產(chǎn)率、畸形率：各組已孕母鼠妊娠期間均無流產(chǎn)跡象，且所產(chǎn)仔鼠無畸形，即各組流產(chǎn)率、畸形率均為0。 5．孕鼠所產(chǎn)仔鼠數(shù)：實(shí)驗(yàn)組低劑量組

9、(A組)仔鼠數(shù)為10.77±1.79只(140/13，即仔鼠總數(shù)/孕鼠數(shù))，實(shí)驗(yàn)組高劑量組(B組)仔鼠數(shù)為9.78±1.64只(88/9)，EMAb陽性者組[E(+)組]9.67±1.53只(30/3)，EMAb陰性者組[E(-)組]10.32±2.14只(198/19)，對照組(C組)仔鼠數(shù)為12.51±2.02只(213/17)。A組與B組，各組與C組均有顯著性差異(P<0.01)，E(+)組與E(-)組之間無顯著差異(P>0.05

10、)。 6．仔鼠的體重和身長：各組仔鼠的體重分別為實(shí)驗(yàn)組低劑量組(A組)5.47±0.42g，實(shí)驗(yàn)組高劑量組(B組)5.43±0.32g，EMAb陽性者組[E(+)組]5.33±0.24g，EMAb陰性者組[E(-)組]5.48±0.41g，對照組(C組)5.55±0.36g。 E(+)與C組之間有顯著差異(P<0.05)，其余各組與C組、A組與B組、E(+)組與E(-)組之間無顯著差異(P>0.05)。各組仔鼠的身長分別

11、為實(shí)驗(yàn)組低劑量組(A組)6.40±0.19cm，實(shí)驗(yàn)組高劑量組(B組)6.39±0.23cm，EMAb陽性者組[E(+)組]6.37±0.21cm，EMAb陰性者組[E(-)組]6.39±0.20g，對照組(C組)6.42±0.18cm。各組之間無顯著差異(P>0.05)。 7．胎盤的重量和直徑：各組胎盤的重量分別為實(shí)驗(yàn)組低劑量組(A組)0.67±0.06g，實(shí)驗(yàn)組高劑量組(B組)0.71±0.08g，EMAb陽性者組[E(+)

12、組]0.74±0.05g，EMAb陰性者組[E(-)組]0.70±0.09g，對照組(C組)0.65±0.07g。A組與C組，E(+)組與E(-)組有顯著性差異(P<0.05)，A組與B組，B組與C組、E(+)組與C組、E(-)組與C組均有極顯著性差異(P<0.01)。 各組胎盤的直徑分別為實(shí)驗(yàn)組低劑量組(A組)14.92±0.84mm，實(shí)驗(yàn)組高劑量組(B組)15.31±1.32mm，EMAb陽性者組[E(+)組]15.48±1

13、.20mm，EMAb陰性者組[E(-)組]15.39±1.31mm，對照組低劑量組(C組)14.6±0.73mm。A組與C組有顯著性差異(P<0.05)，A組與B組、B組與C組、E(+)組與C組、E(-)組與C組有極顯著性差異(P<0.01)，E(+)組與E(-)組之間無顯著差異(P>0.05)。 8．組織病理學(xué)檢查：實(shí)驗(yàn)組EMAb陽性的未孕子宮內(nèi)膜腺細(xì)胞排列欠規(guī)則，其內(nèi)呈空泡改變，而對照組未孕子宮內(nèi)膜腺細(xì)胞排列規(guī)則，其內(nèi)無空泡

14、改變。 實(shí)驗(yàn)組和對照組已孕子宮組織結(jié)構(gòu)無明顯差別，均為內(nèi)膜腺體高度增生，呈乳突狀或菜花狀凸向?qū)m腔，腺細(xì)胞呈高柱狀，排列規(guī)則。 實(shí)驗(yàn)組和對照組胎盤組織結(jié)構(gòu)無明顯差別，均含有豐富的血液。 結(jié)論：1.采用大鼠腹腔注射純化人子宮內(nèi)膜抗原(EMAg)能誘導(dǎo)大鼠體內(nèi)產(chǎn)生抗子宮內(nèi)膜抗體(EMAb)。EMAb的陽性率與注射的子宮內(nèi)膜抗原(EMAg)劑量無關(guān)。 2．抗子宮內(nèi)膜抗體(EMAb)能夠降低大鼠的受孕率，并使其產(chǎn)仔