RSRC1在雌激素信號(hào)通路中的功能研究.pdf

1、雌激素信號(hào)通路由一系列復(fù)雜的信號(hào)級(jí)聯(lián)反應(yīng)組成,通過(guò)雌激素與雌激素受體ERs(estrogen receptors)相結(jié)合,從而引發(fā)以及啟動(dòng)含有雌激素應(yīng)答元件(estrogen-responsive element, ERE)的靶基因轉(zhuǎn)錄等一系列下游事件,產(chǎn)生相應(yīng)的生理學(xué)效應(yīng),如調(diào)控乳腺癌的發(fā)生發(fā)展。
　　ER包括ERα和ERβ,它們屬于甾體類(lèi)核受體超家族,是配體依賴(lài)的轉(zhuǎn)錄因子。這兩個(gè)亞型均包括以下結(jié)構(gòu)域:激活功能結(jié)構(gòu)域1/2(ac

2、tivation function domain1/2,AF-1/2)、DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域(DNA-binding domain,DBD)、和配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域(LBD,ligand-binding domain)。通過(guò)酵母雙雜交技術(shù)釣取了可以與ERβ結(jié)合的蛋白質(zhì)RSRC1,初步試驗(yàn)表明該分子可以對(duì)雌激素信號(hào)通路發(fā)生影響。人RSRC1基因位于第三號(hào)染色體3q25區(qū)域,共編碼334個(gè)氨基酸,其理論分子量應(yīng)為38.66kD。該蛋白富含精氨酸和絲氨

3、酸,并在第180-224氨基酸的區(qū)域內(nèi)能夠形成螺旋卷曲(coiled-coil)結(jié)構(gòu),故將其命名為RSRC1(arginine-serine-rich coiled-coil1)。目前對(duì)RSRC1的功能研究只有一篇文獻(xiàn),認(rèn)為RSRC1在RNA的組成性剪切和選擇性剪切過(guò)程中均發(fā)揮重要作用。為了對(duì)其生物學(xué)功能進(jìn)行更深入的研究,在前期工作基礎(chǔ)上,對(duì)RSRC1與ERα和ERβ間的相互作用以及該相互作用對(duì)雌激素信號(hào)通路的影響進(jìn)行了深入研究。

4、>　　免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)表明,RSRC1可以與ERα和ERβ結(jié)合,其中,RSRC1與ERα的結(jié)合可受到雌激素的刺激,并表現(xiàn)出對(duì)雌激素的劑量依賴(lài),而與ERβ的結(jié)合則表現(xiàn)為雌激素的非依賴(lài)性,且將RSRC1與ERβ間相互作用位點(diǎn)定位于第163-196位氨基酸片段之中。
　　通過(guò)ERE-luc報(bào)告基因熒光素酶活性的測(cè)定,發(fā)現(xiàn)RSRC1以雌激素非依賴(lài)的方式特異性地增強(qiáng) ERE-luc報(bào)告基因的活性,并且在乳腺癌細(xì)胞中, RSRC1能夠與ERα/

5、β以協(xié)同方式增強(qiáng)ERE-luc報(bào)告基因的活性。此外,我們還發(fā)現(xiàn)RSRC1是一個(gè)可以發(fā)生類(lèi)泛素化(SUMO)修飾的蛋白底物,為進(jìn)一步探討SUMO化修飾對(duì)RSRC1的生物學(xué)功能的影響,構(gòu)建了SUMO-1的小干擾RNA,以及一系列RSRC1的不同長(zhǎng)度和位點(diǎn)的突變體,最終確定了RSRC1的SUMO化修飾位點(diǎn)位于第151-157位氨基酸片段之中。而RSRC1發(fā)生SUMO化修飾是其增強(qiáng)ERE-luc活性所必須的。
　　綜上所述,發(fā)現(xiàn)RSRC1