依達(dá)拉奉對(duì)膿毒癥大鼠心肌細(xì)胞保護(hù)作用的研究.pdf

1、研究目的:
　　 本研究擬建立大鼠膿毒癥模型，通過檢測(cè)依達(dá)拉奉對(duì)膿毒癥大鼠血清肌鈣蛋白T(CTnT)，心肌組織腫瘤壞死因子α(TNF-α)、一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)表達(dá)的影響，以及對(duì)心肌細(xì)胞進(jìn)行光鏡、電鏡觀察，探討依達(dá)拉奉對(duì)膿毒癥大鼠心肌組織的保護(hù)作用及其可能的機(jī)制。
　　 材料與方法:
　　 1、實(shí)驗(yàn)分組
　　 SD大鼠54只，隨機(jī)分成3組：對(duì)照組(18只)、膿毒癥組

2、(18只)和治療組(18只)。對(duì)照組大鼠腹腔內(nèi)注射生理鹽水(NS)，30min后予NS經(jīng)鼠尾靜脈注射；膿毒癥組大鼠腹腔內(nèi)注射脂多糖(Lipopolysaccharide，LPS)，于注射LPS后30min予NS經(jīng)鼠尾靜脈注射；治療組大鼠于注射LPS后30min予依達(dá)拉奉3mg/kg經(jīng)鼠尾靜脈注射。各組動(dòng)物按照觀察時(shí)間點(diǎn)隨機(jī)分為造模后6h、12h和24h各3個(gè)亞組。
　　 2、模型制作
　　 健康雄性SD大鼠，稱重，用卵圓

3、鑷夾住大鼠頸背部皮膚令其懸空，剪去腹部鼠毛，2％碘酒、75％酒精消毒后，經(jīng)腹腔注射LPS(10mg/kg)，制備膿毒癥動(dòng)物模型。
　　 3、檢測(cè)指標(biāo)和方法
　　 取造模后6h、12h和24h相應(yīng)實(shí)驗(yàn)組的大鼠，行腹主動(dòng)脈采血5ml，取其上清，酶聯(lián)免疫分析法檢測(cè)血清CTnT含量；快速分離右側(cè)心臟大部分心臟組織，制成組織勻漿，取其上清，酶聯(lián)免疫分析法檢測(cè)心肌腫瘤壞死因子(TNF-α)含量，化學(xué)比色法測(cè)定心肌NO、SOD、MDA

4、含量；快速分離左側(cè)心臟組織，用10％甲醛液固定，制成石蠟切片，H.E染色，光學(xué)顯微鏡下觀察標(biāo)本形態(tài)學(xué)變化；分離右側(cè)心臟小部分心臟組織，加入2.5％戊二醛固定液中固定，電鏡觀察。
　　 4、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
　　 本研究的數(shù)據(jù)采取SPSS13.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)量資料均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((-x)±S)表示；多組間比較用方差分析；對(duì)于不同處理組的兩兩比較，主要利用了LSD-t法檢驗(yàn)。以p＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

5、>　　 結(jié)果:
　　 1、血清CTnT含量的變化
　　 在6h時(shí)、12h時(shí)和24h時(shí)點(diǎn)各組血清中CTnT濃度，膿毒癥組＞治療組＞對(duì)照組，各組之間有顯著差異(p＜0.01)。膿毒癥組和治療組CTnT在12h達(dá)到高峰。
　　 2、心肌勻漿TNF-α的變化
　　 在6h、12h和24h時(shí)點(diǎn)上各組心肌勻漿TNF-α水平，膿毒癥組＞治療組＞對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。膿毒癥組和治療組心肌勻漿中的TN

6、F-α在6h時(shí)達(dá)到高峰，隨著建模時(shí)間的延長(zhǎng)，心肌勻漿中的TNF-α逐漸回落；同一組內(nèi)各時(shí)點(diǎn)之間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。
　　 3、心肌勻漿MDA的變化
　　 在6h、12h和24h時(shí)點(diǎn)上各組心肌勻漿中MDA的表達(dá)，膿毒癥組＞治療組＞對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。膿毒癥組和治療組隨著建模時(shí)間的延長(zhǎng)，心肌勻漿中MDA的表達(dá)逐漸增高；同一組內(nèi)各時(shí)點(diǎn)之間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。

7、　　 4、心肌勻漿SOD活性的變化
　　 在6h和12h時(shí)點(diǎn)各組心肌勻漿中SOD活性，膿毒癥組＜對(duì)照組＜治療組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)；在24h時(shí)點(diǎn)心肌勻漿中SOD活性，膿毒癥組＜對(duì)照組，膿毒癥組＜治療組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)，治療組＜對(duì)照組，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05)。膿毒癥組和治療組隨著建模時(shí)間的延長(zhǎng)，心肌勻漿中SOD活性逐漸下降；同一組內(nèi)各時(shí)點(diǎn)之間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。

8、r>　　 5、心肌勻漿NO含量的變化
　　 在6h、12h和24h時(shí)點(diǎn)各組心肌勻漿中的NO含量，膿毒癥組＞治療組＞對(duì)照組，各組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。膿毒癥組和治療組心肌勻漿中的NO含量隨著建模時(shí)間的延長(zhǎng)，逐漸增加；同一組內(nèi)各時(shí)點(diǎn)之間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。
　　 6、心肌組織光鏡下的變化
　　 對(duì)照組心肌組織結(jié)構(gòu)正常。膿毒癥組心肌纖維束排列疏松，心肌纖維斷裂、溶解，心肌細(xì)胞嗜酸性

9、變，心肌間質(zhì)水腫，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。隨著建模時(shí)間的延長(zhǎng)，可見部分心肌細(xì)胞變性，間質(zhì)水腫加重。治療組與膿毒癥組相比，心肌細(xì)胞斷裂、溶解減輕，間質(zhì)水腫明顯改善。
　　 7、心肌組織電子顯微鏡下的變化
　　 對(duì)照組心肌纖維、線粒體結(jié)構(gòu)正常，心肌纖維排列整齊，核膜平整，染色質(zhì)均勻，心肌閏盤結(jié)構(gòu)正常。膿毒癥組心肌纖維排列紊亂，心肌細(xì)胞肥大、斷裂，閏盤分離，線粒體增生、腫脹，嵴減少；心肌組織間質(zhì)水腫。治療組與膿毒癥組相比，心肌纖維排列紊