阿司匹林對(duì)缺血性腦卒中患者血小板膜糖蛋白表達(dá)的影響及GPⅡb基因多態(tài)性的研究.pdf

1、目的:本研究通過觀察急性缺血性腦卒中(IS)患者血小板膜糖蛋白PAC-1、CD62p、CD63表達(dá)的變化，研究血小板膜糖蛋白PAC-1、CD62p、CD63與急性IS的相關(guān)性，探討應(yīng)用血小板膜糖蛋白PAC-1、CD62p、CD63監(jiān)測血小板的活化狀態(tài)和預(yù)測急性IS發(fā)病的可能性;并通過檢測急性IS患者血小板聚集率及血小板膜GPⅡ b HPA-3基因多態(tài)性，探討其與血小板膜糖蛋白表達(dá)及與阿司匹林抵抗(AR)的相關(guān)性，以期對(duì)急性IS患者提供抗

2、血小板治療的依據(jù)。
　　 方法:
　　 1、急性IS患者226例，對(duì)照組100例，對(duì)照組分為正常對(duì)照組40例及高危對(duì)照組60例，高危對(duì)照組為合并卒中危險(xiǎn)因素如高血壓、糖尿病、冠心病等危險(xiǎn)因素者，所有受試者均常規(guī)檢測血常規(guī)、凝血常規(guī)、肝功能、血脂、血糖等生化指標(biāo)，病例組入院后立即用美國國立衛(wèi)生院神經(jīng)功能缺損(NIHSS)評(píng)分對(duì)其進(jìn)行神經(jīng)功能測評(píng)，按評(píng)分結(jié)果分為輕、中、重3個(gè)亞組。根據(jù)患者48小時(shí)內(nèi)病情是否加重分為進(jìn)展性IS

3、及穩(wěn)定型IS。
　　 2、采用流式細(xì)胞儀(FCM)檢測病例組及對(duì)照組血小板膜糖蛋白PAC-1、CD62p、CD63的表達(dá)，并分別以二磷酸腺苷(ADP)和花生四烯酸(AA)做誘導(dǎo)劑，用流式細(xì)胞儀檢測以上兩組患者的血小板聚集率。并應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性酶切片斷長度多態(tài)性分析方法檢測病例組及對(duì)照組血小板膜GPⅡ bHPA-3基因多態(tài)性。
　　 3、其中病例組111例患者予阿司匹林腸溶片100mg/d干預(yù)治療7d后復(fù)查血小板膜

4、糖蛋白PAC-1、CD62p、CD63的表達(dá)及血小板聚集率。
　　 4、觀察病例組不同NIHSS分組血小板膜糖蛋白PAC-1、CD62p、CD63的表達(dá)及血小板聚集率。
　　 5、觀察進(jìn)展性IS與穩(wěn)定型IS患者血小板膜糖蛋白PAC-1、CD62p、CD63的表達(dá)及血小板聚集率。
　　 6、探討血小板膜GPⅡ b HPA-3基因多態(tài)性與血小板膜糖蛋白PAC-1、CD62p、CD63表達(dá)的相關(guān)性。
　　 7、

5、根據(jù)阿司匹林干預(yù)治療后檢測的血小板聚集率水平，篩查AR患者（根據(jù)本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果，由ADP做誘導(dǎo)劑所測得的血小板聚集率＞51.35％;由AA做誘導(dǎo)劑所測得的血小板聚集率＞47.63％，滿足上述兩項(xiàng)者定義為AR)，并探討AR者與血小板膜GPⅡ b HPA-3基因多態(tài)性的相關(guān)性。
　　 結(jié)果:
　　 1、病例組、高危對(duì)照組與正常對(duì)照組血小板膜糖蛋白PAC-1、CD62p、CD63表達(dá)水平的比較:病例組血小板膜糖蛋白PAC-1(

6、30.26±15.56％)表達(dá)水平高于正常對(duì)照組(24.22±10.86％，P＜0.05)。病例組血小板膜糖蛋白CD62p(16.28±7.41％)表達(dá)水平高于正常對(duì)照組（13.35±5.86％，P＜0.05）;高危對(duì)照組CD62p(16.59±6.55％)表達(dá)水平高于正常對(duì)照組(P＜0.05）。病例組血小板膜糖蛋白CD63(20.79±9.64％)表達(dá)水平高于高危對(duì)照組(16.34±6.74％)及正常對(duì)照組(13.35±5.86％)，

7、均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）。
　　 2、以ADP做誘導(dǎo)劑檢測血小板聚集率，病例組(31.30±12.78％)及高危對(duì)照組(31.25±11.09％)血小板聚集率水平均高于正常對(duì)照組(23.80±10.86％)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，病例組與高危對(duì)照組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。以AA做誘導(dǎo)劑檢測血小板聚集率，病例組(30.56±12.77％)血小板聚集率水平高于高危對(duì)照組(26.45±11.09％)及正常對(duì)照組(23.80

8、±11.86％)，且高危對(duì)照組血小板聚集率水平高于正常對(duì)照組，均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。
　　 3、病例組不同NIHSS分組血小板膜糖蛋白PAC-1表達(dá)無顯著性差異，F(xiàn)值1.390，P=0.251; CD62p表達(dá)無顯著性差異，F(xiàn)值0.06，P=0.994; CD63表達(dá)無顯著性差異，F(xiàn)值2.132，P=0.121;由ADP做誘導(dǎo)劑測得的血小板聚集率無顯著性差異，F(xiàn)值1.431，P=0.241;由AA做誘導(dǎo)劑測得的血小板聚

9、集率無顯著性差異，F(xiàn)值1.140，P=0.322。
　　 4、阿司匹林干預(yù)治療后血小板膜糖蛋白PAC-1、CD62p、CD63的表達(dá)及血小板聚集率水平較干預(yù)前明顯下降，干預(yù)前PAC-1、CD62p、CD63及由ADP、AA誘導(dǎo)的血小板聚集率分別為:30.07±15.61％、16.41±7.45％、20.80±9.67％、31.16±12.80％、30.48±12.84％;干預(yù)后PAC-1、CD62p、CD63及由ADP、AA誘導(dǎo)

10、的血小板聚集率分別為:21.63±12.80％、9.42±7.00％、14.92±10.35％、24.65±12.09％、20.23±13.24％;差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 5、穩(wěn)定型較進(jìn)展性IS患者血小板膜糖蛋白PAC-1(29.09±14.64％vs37.43±18.19％)、CD62p(15.56±7.27％ vs20.16±7.24％)表達(dá)水平低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　 6、本研

11、究發(fā)現(xiàn)AR者6人，阿司匹林敏感(AS)者105人，AR發(fā)生率約為5.4％。AR組與AS組血小板膜糖蛋白PAC-1(49.56±14.12％vs28.95±15.00％)、CD62p(24.73±7.19％ vs15.84±7.18％)、CD63(33.58±9.16％ vs20.07±9.21％)表達(dá)水平比較，AR組血小板膜糖蛋白PAC-1、CD62p、CD63表達(dá)水平顯著高于AS組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 7

12、、血小板膜GPⅡb HPA-3 aa、ab、bb3種基因型PAC-1表達(dá)率分別為:27.55±16.97％、30.99±15.34％、32.86±13.06％;3種基因型CD62p表達(dá)率分別為:16.77±7.93％、15.92±7.41％、32.86±13.06％; bb基因型PAC-1、CD62p表達(dá)的均值高于aa基因型及ab基因型，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，是否bb基因型者發(fā)生IS后可能更易導(dǎo)致血小板膜糖蛋白的高表達(dá)，有待進(jìn)一步研究。

13、>　　 8、病例組發(fā)生AR者中血小板膜GPⅡb HPA-3 bb基因型頻率較aa、ab基因型高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.041)，提示血小板膜GPⅡb HPA-3 bb基因型可能與阿司匹林抵抗相關(guān)。
　　 結(jié)論:
　　 1、急性IS患者血小板高度活化，應(yīng)用FCM檢測血小板膜糖蛋白PAC-1、CD62p、CD63的表達(dá)可以作為檢測血小板活化程度的敏感指標(biāo)。
　　 2、進(jìn)展性較穩(wěn)定型IS患者血小板活化程度高，提示

14、是否血小板膜糖蛋白表達(dá)增高顯著的IS患者發(fā)展為進(jìn)展性IS的可能性大。
　　 3、高危對(duì)照組血小板膜糖蛋白的表達(dá)及聚集率高于健康人，提示存在卒中危險(xiǎn)因素如高血壓、冠心病、糖尿病者血小板處于活化狀態(tài)，應(yīng)嚴(yán)格控制卒中的危險(xiǎn)因素，減少血小板膜糖蛋白的表達(dá)及血小板聚集率，以降低腦卒中及血栓事件的發(fā)生率。
　　 4、阿司匹林可以減少血小板表面膜糖蛋白的表達(dá)及血小板聚集率，抑制血小板的活化。
　　 5、GPⅡb HPA-3三種

15、基因型血小板膜糖蛋白PAC-1、CD62p及CD63的表達(dá)無顯著性差異，但bb基因型PAC-1、CD62p表達(dá)的均值高于aa基因型及ab基因型，是否IS bb基因型攜帶者更易引起血小板活化，有待進(jìn)一步研究。
　　 6、IS患者存在AR現(xiàn)象，本研究中AR患者占5.4％，AR患者服用阿司匹林后不能有效抑制血小板聚集，其膜糖蛋白仍高表達(dá)，且與血小板膜GPⅡbHPA-3bb基因型相關(guān)，提示血小板膜GPⅡ b HPA-3bb基因型可能為A