基于FGFR靶點(diǎn)的3-取代喹喔啉類似物的設(shè)計(jì)、合成及其設(shè)計(jì)抗腫瘤活性初探.pdf

1、目的：
　　以FGFR為靶標(biāo)，根據(jù)結(jié)合于ATP結(jié)合位點(diǎn)的小分子抑制劑的結(jié)構(gòu)特征設(shè)計(jì)并合成喹喔啉類酪氨酸激酶小分子抑制劑，對(duì)所合成化合物進(jìn)行FGFR-1抑制活性測試以及體外抗腫瘤活性測試。
　　方法：
　　1.以鄰苯二胺和丙酮酸為原料經(jīng)過環(huán)合得到3-甲基喹喔啉-2(1H)-酮，再與不同的取代醛反應(yīng)得到3-取代喹喔啉類衍生物，并以此為中間產(chǎn)物通過取代得到其他類型的喹喔啉類似物。
　　2.采用LANCE Ultra T

2、R-FRET Assays，以PD173074作為陽性對(duì)照藥，在10μM、1μM和0.1μM三種濃度下篩選所合成的27個(gè)化合物對(duì)FGFR-1的抑制活性。
　　3.采用MTT法，以5-氟尿嘧啶作為陽性對(duì)照藥，在50μM、10μM、2μM和0.4μM四種濃度下檢測27個(gè)化合物對(duì)H460、Hela229、B16-F10和Hct116四種腫瘤細(xì)胞株的抗增殖作用。進(jìn)一步探討四個(gè)化合物A12、B4、C2和D2對(duì)H460細(xì)胞株增殖抑制活性的存活

3、率-時(shí)間依賴關(guān)系。應(yīng)用上述MTT法，考察所合成化合物對(duì)正常肝細(xì)胞HL7702的細(xì)胞毒性。
　　結(jié)果：
　　1.包括中間產(chǎn)物在內(nèi)，共合成了27個(gè)目標(biāo)化合物(A1-14，B1-5，C1-5，D1-3)其中包含15個(gè)未見報(bào)道的新化合物，目標(biāo)化合物的結(jié)構(gòu)經(jīng)過ESI-MS、IR、1H-NMR確認(rèn)。
　　2.激酶活性篩選顯示，所合成的多數(shù)化合物具有一定的FGFR-1抑制活性。其中A4在10μM、1.0μM、0.1μM三種濃度下對(duì)F

4、GFR-1均表現(xiàn)出較好的抑制活性，抑制率分別為74.33±3.1％、65.43±2.3％、60.29±2.4％，并且具有較好的計(jì)量關(guān)系。另外還有A1和A2兩個(gè)化合物在10μM時(shí)對(duì)激酶的抑制率超過50％。其他化合物對(duì)FGFR-1雖具有一定的抑制作用，但抑制率普遍不高。
　　3.體外抗增殖結(jié)果顯示，合成的大部分化合物對(duì)H460、Hela229、B16-F10和Hct116四種腫瘤細(xì)胞表現(xiàn)出較好的抑制作用。對(duì)于H460細(xì)胞，化合物A2、

5、A3、A12等14個(gè)化合物的IC50值均小于10μM。對(duì)于Hela229細(xì)胞，只有化合物A12的IC50值小于10μM，為2.89±0.24μM。對(duì)于B16-F10細(xì)胞，化合物A1、A2、A3等18個(gè)化合物的IC50值均小于10μM。對(duì)于Hct116細(xì)胞，化合物A2、A12、B1等7個(gè)化合物的IC50值均小于10μM。存活率-時(shí)間依賴關(guān)系實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，化合物A12和B4表現(xiàn)出較好的存活率-時(shí)間依賴關(guān)系，細(xì)胞存活率隨作用時(shí)間的增長逐漸降低

6、。體外肝毒性結(jié)果表明，所合成的化合物絕大多數(shù)顯示出低于五氟尿嘧啶的肝毒性，其中8個(gè)化合物在10μM下對(duì)肝細(xì)胞的抑制率幾乎為零?？傮w而言該類化合物顯示出較好的安全性。
　　結(jié)論：
　　1.本文通過一系列化學(xué)合成，得到四類共27個(gè)喹喔啉類似物，并且通過ESI-MS、IR、1H-NMR對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)行鑒定。
　　2.通過LANCE Ultra TR-FRET法測定了體外FGFR-1抑制活性，根據(jù)體外激酶抑制實(shí)驗(yàn)得出:A1、A2和

7、A4三個(gè)化合物在10μM時(shí)的抑制率超過50％，但是其抑制率均未超過陽性對(duì)照藥PD173074。1-位N上無取代時(shí)表現(xiàn)出較好的抑制作用，2-位為羰基時(shí)的激酶抑制活性最好，這可能是因?yàn)轷０锋I更容易與ATP結(jié)合位點(diǎn)形成氫鍵有關(guān)，與最初的設(shè)計(jì)相符。
　　3.通過MTT法測定了體外抗腫瘤活性，根據(jù)MTT實(shí)驗(yàn)得出:化合物A2、A3、B2、B3和B4對(duì)四種腫瘤細(xì)胞均具有較好的抑制作用，且抑制率隨藥物濃度的增加逐漸增加，化合物B4對(duì)H460細(xì)胞株