rDC輸注誘導(dǎo)大鼠供者特異性移植物免疫低反應(yīng).pdf

1、目的和意義:樹突狀細(xì)胞(DC)是機(jī)體內(nèi)功能最強(qiáng)大的抗原提呈細(xì)胞,它不但可以啟動(dòng)免疫反應(yīng)而且也能負(fù)向調(diào)控免疫反應(yīng),有觀點(diǎn)認(rèn)為其功能不同是因所處的成熟階段或活化狀態(tài)不同；另外一些觀點(diǎn)則認(rèn)為體內(nèi)存在專門的具有免疫負(fù)向調(diào)控作用的DC,即調(diào)節(jié)性DC(rDC)。DC是一種具有較強(qiáng)可塑性的抗原遞呈細(xì)胞,可通過不同的方法"程序化"DC而達(dá)到致耐受原特性。近來有資料顯示藥理學(xué)調(diào)控DC可產(chǎn)生強(qiáng)有效的rDC,本文通過培養(yǎng)rDC,研究其生物學(xué)特性,并對(duì)rDC在

2、同種異體排斥反應(yīng)的調(diào)控及其效果進(jìn)行初步探討,以期將來能在臨床器官移植中應(yīng)用。 研究方法:培養(yǎng)三種不同DC:a)通過加入地塞米松(DEX)獲得未成熟DC(imDC),b)通過脂多糖(LPS)活化獲得成熟(matDC),c)通過DEX預(yù)處理LPS活化獲得rDC。流式細(xì)胞儀檢測(cè)各種DC的表型,酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(EUSA)測(cè)量DC稀釋培養(yǎng)上清液中的細(xì)胞因子含量。建立同種異基因大鼠腹腔心臟移植模型,在移植前7天受者輸注(靜脈)各種供者來源

3、DC,術(shù)后觀察比較移植心臟存活時(shí)間。心臟標(biāo)本病理切片比較排異反應(yīng)病理分級(jí),逆轉(zhuǎn)錄PCR檢測(cè)受者淋巴結(jié)細(xì)胞Foxp3 mRNA表達(dá)。運(yùn)用SPSS13.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理,計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差( ±s)表示,組間差異用Student′st檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料比較采用確切概率Fisher檢驗(yàn)；不同組間生存分析用Kaplan-Meier檢驗(yàn)；P<0.05為差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果：體外誘導(dǎo)的rDC表現(xiàn)為部分成熟的細(xì)胞表型,細(xì)胞表面CD

4、40表達(dá)較imDC組明顯增加,CD86和MHC-Ⅱ表達(dá)與imDC類似,無顯著差異。予DEX預(yù)處理組(imDC和rDC)對(duì)細(xì)胞凋亡或死亡無明顯影響,而使用LPS刺激細(xì)胞成熟matDC組(未用DEX預(yù)處理)可發(fā)現(xiàn)細(xì)胞死亡增加.rDC分泌產(chǎn)生IL-12、IL-10水平都顯著高于imDC,但I(xiàn)L-12生成上調(diào)在很大程度上被DEX預(yù)處理抵消,因此,反映了機(jī)體免疫反應(yīng)狀況的IL-10/IL-12比值較后者有顯著升高。袖套法建立大鼠腹腔異位心臟移植模

5、型,手術(shù)成功率可達(dá)80﹪以上。rDC靜脈輸注較imDC、matDC和PBS輸注可顯著延長同種異體心臟移植物平均生存時(shí)間(mean survivaltime,MST)。靜脈輸注DC后7天獲取受者淋巴結(jié)組織,檢測(cè)淋巴結(jié)細(xì)胞中CD4+CD25+Treg的標(biāo)志Foxp3 mRNA的表達(dá)顯示:PBS組幾乎不表達(dá)Foxp3mRNA,matDC組表達(dá)較低,imDC組和rDC組均能明顯誘導(dǎo)二級(jí)淋巴組織細(xì)胞表達(dá)Foxp3 mRNA上調(diào),與前兩組比較差異有

6、顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),但兩者之間比較無顯著差異(P=0.13)。 結(jié)論：DEX預(yù)處理LPS活化可以誘導(dǎo)大鼠骨髓細(xì)胞獲得rDC.體外誘導(dǎo)獲得的rDC表現(xiàn)為部分成熟的細(xì)胞表型,細(xì)胞表面 CD40 表達(dá)較imDC組增加。rDC分泌IL-12、IL-10顯著高于imDC,但I(xiàn)L-12生成部分被DEX抵消,致使IL-10/IL-12比值較后者升高。袖套法建立大鼠腹腔異位心臟移植模型操作簡(jiǎn)便,手術(shù)成功率可達(dá)80﹪以上。移植前靜脈輸